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澳睿赛生物技术(上海)有限公司
淋巴瘤细胞
肿瘤细胞
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血液
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人
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淋巴母细胞样
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常温/干冰运输
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悬浮细胞
1×106Cells/T25培养瓶
一、细胞基本属性
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细胞名称
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Nalm-6 (人B淋巴白血病细胞)
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细胞别称
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NALM6;NALM-6
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商品货号
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ORC0991
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种属来源
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人
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年龄性别
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男性,19岁
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组织来源
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血液
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生长特性
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悬浮细胞
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细胞形态
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淋巴母细胞样
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背景介绍
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NALM-6细胞由19岁患有急性淋巴细胞白血病(ALL)的19岁男子的外周血建立,在1976年复发。该细胞CD24阳性,可与CD24阴性细胞N6/ADR成对,用于CD24的功能研究。
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生物安全等级
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1
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细胞规格
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1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
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支原体检测
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无
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培养基
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RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
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培养条件
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气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
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冻存条件
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冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度:液氮
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倍增时间
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25 hours (PubMed=25984343); 19 hours (PubMed=20922763); 40.2 hours (PubMed=8847894); ~36 hours (DSMZ)
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传代比例
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1:2-1:3
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换液频率
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2-3次/周
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二、细胞培养操作
1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
悬浮传代:
用移液管轻轻吹打瓶壁,直接将溶液吸入离心管离心即可。
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、培养注意事项
1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由 客户自行承担。
3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4、贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,,用新鲜的完全培养基重悬 细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。
5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞 的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7、该细胞仅供科研使用。
8、备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 1:2 传代 。
9、注意:1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
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