猪瘟病毒疫苗株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

猪瘟病毒疫苗株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

英文名称：Classical Swine Fever Virus-Vaccine(CSFV-Vaccine) SYBR qRT-PCR Kit 
猪瘟(Classical swine fever，CSF)是由 CSF 病毒(CSFV)引起的一种高度接 触性传染病，以稽留高热、出血和高死亡率为主要特征，被世界动物卫生组织列为 必须呈报的动物疫病。目前，该病主要流行于亚洲、欧洲和南美洲，在家猪和野猪 中广泛传播，给养猪业造成严重的经济损失。近年来，CSF 在中国的流行和发病 特点发生了很大变化，在临床表现上趋于复杂化，出现了所谓“非典型猪瘟”、“温 和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”，在病理剖检上也常常不同于典型猪瘟的病理变 化，给兽医临床诊断造成了较大困难。本产品是基于染料法荧光定量 PCR 原理开 发，专门检测猪瘟病毒疫苗株的试剂盒。

产品特点：

1.一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据猪瘟病毒疫苗株的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 基于染料法 qRT-PCR 检测，灵敏度比常规 RT-PCR 高 10-100 倍，可以达 到至少 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 qRT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中 间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。 5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。

猪瘟病毒疫苗株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	2×qRT-PCR 缓冲液	500 μL（棕色管）
试剂二	10×qRT-PCR酶混合液	100 μL（红盖）
试剂三	ROX染料I	50 μL（棕色管）
试剂四	ROX染料II	50 μL（棕色管）
试剂五	荧光PCR专用模板稀释液	1mL（亮黄盖）
试剂六	猪瘟病毒疫苗株RT-PCR引物混合液	100 μL（白盖）
试剂七	猪瘟病毒疫苗株RT-PCR阳性对照 （1×10E8拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂八	酸释放剂试用装	20次（1mL，绿盖）
说明书	使用手册	1份

运输及保存：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：样品RNA

使用方法：

一、稀释阳性对照（以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。

二、样品RNA的制备

三、设置RT-PCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）

成分	N+2 个 样品管	RT-PCR阴性对照	RT-PCR阳性 对照（2-7管）
2×qRT-PCR 缓冲液	10 μL	10 μL	各10 μL
猪瘟病毒疫苗株RT-PCR 引物混合物	2 μL	2 μL	各2 μL
50×ROX (见注)	0.4μL	0.4μL	各0.4μL
样品制备所得RNA模板（来于第8步）	5.6μL
稀释所得6个阳性对照（来于第6步）			各5.6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）
10×qRT-PCR酶混合液	2μL	2μL	2μL

注:需使用ROX染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。需使用ROX染料II的机型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。
不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System， LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene 3000、RotorGene 6000。

9.上机后按下面参数进行RT-PCR（参数可能会因仪器不同而需优化）。

过程	温度	时间
RT（逆转录）	50℃	15-30分钟
预变性	94℃	2分钟
RT - PCR反应 （30个循环）	95℃	15 秒
	60℃	15 秒（采集FAM通道的荧光信号）
	72℃	15 秒
按仪器预设程序进行溶解曲线分析

产品名称	方法	产品规格	价格
猪瘟病毒疫苗株LAMP试剂盒	LAMP	50次	2490
猪瘟病毒疫苗株PCR试剂盒	PCR	50次	1990
猪瘟病毒疫苗株染料法荧光定量PCR试剂盒	染料法	50次	2490
猪瘟病毒疫苗株探针法荧光定量PCR试剂盒	探针法	50次	2990