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- 2025年08月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae(R-Kp)
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
英文名称：Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae(R-Kp)
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。为此本公司开发了简单快捷的抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR 检测试剂盒。
产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR试剂盒包装规格及成分：
| 编号 |
成分 |
规格 |
| 试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） |
| 试剂二 |
超纯水 | 1 mL（亮黄色） |
| 试剂三 |
抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 |
抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。
自备试剂：DNA 模板
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
| 成分 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照 | PCR 阳性 对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌 PCR 引物 混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | ||
| PCR 阴性对照（水） | 18 μL | ||
| PCR 阳性对照（抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） | 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应 （35 个循环） | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 30 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。
抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR试剂盒相关产品：
| 产品名称 |
方法 |
产品规格 |
价格 |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌LAMP试剂盒 | LAMP |
50次 |
2490 |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR试剂盒 | PCR |
50次 |
1990 |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 |
50次 |
2490 |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 |
50次 |
2990 |
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文献和实验等中发现了此类变异的细菌。携带了这一耐药基因的细菌能够产生一种酶，名叫新德里一号金属酶，英文缩写为NDM-1，而它恰恰能水解和破坏大多数抗生素，使之失效。 关注肠杆菌科细菌耐药 既然产NDM-1菌株主要来源于肠杆菌科细菌，顾兵认为，这足以证实了耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌已成为一个全球性问题。 肠杆菌科细菌主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌等，也是引起医院感染最常见的病原菌。 据2009年度卫生部全国细菌耐药监测（Mohnarin）结果，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离率为革兰
类水解能力存在较大差异，一般根据分子结构分为A、B、C、D四大类，其中B类酶在其活性部位结合有锌离子，因此又称为金属β－内酰胺酶。其水解底物包括青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类等，表现为产酶细菌对这些药物广泛耐药。金属β－内酰胺酶首先在铜绿假单胞菌、不动杆菌中发现。近年来，在肠杆科细菌，如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等中也有发现。迄今为止已经确定的金属β－内酰胺酶除NDM－1外，还包括IMP、VIM、GIM、SIM、SPM等型别。 最早报道的产NDM－1细菌为肺炎克雷伯菌，于2008年在一位印度裔
。而且，产生AmpC酶的菌株不被β-内酰胺酶 抑制剂抑制。如果同时拌有孔蛋白基因突变或特定的外排泵的过表达，产AmpC酶菌株还可以耐碳青霉烯类药物。染色体介导的AmpCβ-内酰胺酶主要存在肠杆菌，枸橼酸杆菌，沙雷和其他一些革兰阴性细菌中，通常表达水平低，但可被青霉素类，碳青霉烯类，和一些头孢类如头孢西丁诱导高水平表达。III和IV代头孢菌素不诱导AmpC酶，但他们可以被水解；质粒介导的AmpC酶可以在细菌之间传播，主要存在于临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠杆菌中。目前CLSI还没有确认的AmpC酶表型确证试验
