类鼻疽伯克霍尔德菌PCR试剂盒

类鼻疽伯克霍尔德菌PCR试剂盒
英文名称：Burkholderia pseudomallei
类鼻疽(melioidosis)是由类鼻疽伯克霍尔德菌所致的地方性传染病，人主要 是通过接触含有致病菌的水和土壤，经破损的皮肤而受感染。本菌含有两种主要 抗原，一为特异性耐热多糖抗原，另一为与鼻疽杆菌相同的不耐热蛋白质共同抗 原。本病临床表现复杂，有急性败血症者常伴多处化脓性损害，慢性者类似空洞 型肺结核表现。病情一般较为严重，如不及时治疗，病死率甚高。本产品就是以荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测类鼻疽伯克霍尔德菌的试剂盒。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。 
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增类鼻疽伯克霍尔德菌。 
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。 
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。 
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

类鼻疽伯克霍尔德菌PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	类鼻疽伯克霍尔德菌PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	类鼻疽伯克霍尔德菌PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 类鼻疽伯克霍尔德菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
类鼻疽伯克霍尔德菌PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（类鼻疽伯克霍尔德菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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