鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒

鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒
英文名称：Beak and Feather Disease Virus（BFDV） PCR Kit
鹦鹉喙羽病病毒(Beak and Feather Disease Virus，BFDV) 是一种由 单股 DNA 病毒，会引起鹦鹉喙羽病，是一种致死性传染病，会造成患鸟掉羽， 羽毛萎缩变形，鸟喙变形，胸腺及华氏囊结构等异常病症，感染此病的患鸟， 可能完全没有症状或者只出现轻微的羽生异常症状，在数年之后免疫力下降或 出现并发症时才发病死亡。但是其间仍会不断的排毒，仍具有传染性且传播范 围较广，对生物健康造成严重损害，因此鹦鹉喙羽病病毒的快速准确鉴定对该 病的预防和检疫有着重要作用，本产品就是根据 PCR 原理开发的专门检测鹦鹉喙羽病病毒的试剂盒。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
3. 产品精心优化且特异性高，引物是根据鹦鹉喙羽病病毒 DNA 高度保守区设 计，不会跟除此之外的其它微生物 DNA 发生交叉反应。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 PCR 反应。
6. 本产品只能用于定性实验，不能用于定量。
7. 本产品只能用于科研。

鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	鹦鹉喙羽病病毒PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	鹦鹉喙羽病病毒PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 鹦鹉喙羽病病毒PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
鹦鹉喙羽病病毒PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（鹦鹉喙羽病病毒PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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