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1年
山东绿都
-20
组分 | Nu-P0101(50T) | Nu-P0102(250T) |
DNA-Lysis | 1 mL | 5 mL |
2×TaqMix (With Dye) | 500 μL | 2×1.25mL |
20 μL体系(推荐) | 50 μL体系 | |
2×TaqMix (With Dye) | 10 μL | 25 μL |
引物1 (10 μM)※ | 1 μL | 2 μL |
引物2 (10 μM)※ | 1 μL | 2 μL |
DNA模板 | 0.5-2 μL | 0.5-3 μL |
ddH2O | 补足至20 μL | 补足至50 μL |
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95 oC | 5 min | 1 |
变性 | 95 oC | 15-30 s | 35-40 |
退火 | 50~72 oC | 30 s | |
延伸 | 72 oC | 1 kb/min | |
彻底延伸 | 72 oC | 5 min | 1 |
4 oC | Hold | 1 |
叶片 | |||
烟草 | 拟南芥 | 水稻 | 大豆 |
玉米 | 油菜 | 小麦 | 百脉根 |
西红柿 | 茄子 | 西瓜 | 荔枝 |
龙眼 | 铁皮石斛 | ||
果实和种子 | |||
水稻 | 油菜 | 玉米 | 大豆 |
小麦 | 棉花 | 西红柿 | 茄子 |
胡萝卜 | 香蕉 | 荔枝 | 龙眼 |
苹果 | 草莓 | ||
中草药 | |||
白木耳 | 灵芝 | 丹参 | 益母草 |
红花 | 紫草 | 苦参 | 艾草 |
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
阳性对照和样本都未出现扩增条带 |
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阳性对照有条带,但是样本无条带或者条带比较弱 |
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非特异性条带多 |
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(1)推荐使用梯度PCR对退火温度进行摸索。 (2)推荐使用35-40个循环进行扩增。 (3)降低引物浓度,使引物终浓度在0.1-0.5μM。 (4)重新设计引物。 |
阴性对照出现条带 |
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