亮热厉螨PCR试剂盒

亮热厉螨PCR试剂盒
英文名称：Tropiladaps clareae PCR Kit
亮热厉螨 (Tropiladaps clareae) 又 叫 小蜂螨 ， 引 起 蜜 蜂 的 蜂 螨 病 （acariasis of bees），可以使蜜蜂的幼虫和蛹严重受害，它不但可以使幼虫大 批死亡，腐烂变黑，而且也可使蛹和新出房的幼虫变得残缺不全，蜂群中可见 子脾上有不少的巢房盖被咬破，有的幼虫未化成蛹就死去，有的化蛹后不能羽 化，有的羽化出房时，翅膀残缺不全，幼蜂发育不良，在巢门前或场地上乱爬。 螨病严重的蜂群，由于新蜂不能产生，成年蜂大批死亡，蜂群迅速削弱、甚至 全群覆灭。因此快速准确诊断亮热厉螨具有重要意义。为此本公司基于 PCR 原 理开发了本产品。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供寄生虫 DNA 模板。
2. 根据亮热厉螨保守序列设计的专一性引物，与其他微生物无交叉反应
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。

亮热厉螨PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	亮热厉螨PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	亮热厉螨PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 亮热厉螨 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
亮热厉螨PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（亮热厉螨 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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