耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重PCR试剂盒

耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重PCR试剂盒
英文名称：Vancomycin-Resistant Enterococcus (vanA/vanB) PCR Kit
耐万古霉素肠球菌（Vancomycin-Resistant Enterococcus，VRE）， 又名万古霉素抗药性肠球菌，是肠球菌属下的一种细菌，有着对万古霉素这种 抗生素的抗药性。在肠球菌属中，对人类有着病原性的有粪肠球菌及屎肠球菌。 而所有屎肠球菌更是有着抗药性的，亦即所有屎肠球菌都是 VRE。肠球菌属的 细菌主要是在肠内，亦可以在人类的消化道及尿道内发现。VRE 特别对免疫系 统受损的人有危险性，但是它令健康的人受感染则较少见。一般来说可以引起 心内膜炎、败血病及尿道感染等病症。因此快速灵敏检测耐万古霉素肠球菌 vanA/vanB 基因型具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的 试剂盒。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增耐万古霉素肠球菌 vanA/vanB 基 因型，与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
 

耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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