沃尔巴克氏菌通用PCR试剂盒

沃尔巴克氏菌通用PCR试剂盒
英文名称：Wolbachia spp.
沃尔巴克氏菌(Wolbachia spp.)为革兰氏阴性菌，又称为沃尔巴克氏体，属 于变形菌纲 Proteobacteria 的 α 亚门，立克次氏体科乌巴克体族乌巴克体属中 的一种，1924 年由 Hertig 和 Wolbach 在尖音库蚊 Culexpipiens 的生殖组织 里首次被发现。沃尔巴克氏菌是自然界分布最为广泛的一种共生菌，在鞘翅目、 双翅目、半翅目、同翅目、膜翅目、鳞翅目、直翅目和啮目等 10 多个目的 150 万一 500 万种昆虫中都有共生。沃尔巴克氏菌感染昆虫和其它节肢动物后，会导 致昆虫和其他节肢动物无法产生雄性后代。21 世纪初，对沃尔巴克氏菌的研究 成为热点。科学家们在积极寻找控制沃尔巴克氏菌的新方法或开发消灭沃尔巴克 氏菌的新药物，原因在于一旦控制或消灭沃尔巴克氏菌则有可能消除或抑制病原 性宿主对人类、禽畜和作物造成的伤害。因此快速检测沃尔巴克氏菌具有重要意 义。荧光定量 PCR 是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以 PCR 技术为基础开发的专门检测沃尔巴克氏菌的试剂盒。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。 
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增沃尔巴克氏菌。 
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。 
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。 
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

沃尔巴克氏菌通用PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	沃尔巴克氏菌PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	沃尔巴克氏菌PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 沃尔巴克氏菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
沃尔巴克氏菌PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（沃尔巴克氏菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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