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Brucella bovis SYBR qPCR Kit
/
1年
优利科(上海)生命科学有限公司
-20℃
50T
英文名称:Brucella bovis SYBR qPCR Kit
布鲁氏杆菌(Brucella)是一种革兰氏阴性的不运动细菌,牛感染布鲁氏菌病后的症状有发热,流产,死胎,早产,胎盘滞留,子宫内膜炎,阴道炎,皮炎, 关节炎,关节滑囊炎,食欲不振等。布病的泛滥与畜牧业息息相关。一头奶牛如果感染布鲁氏杆菌,没有得到及时的清洁和防疫,布病很快会在牲畜群体里暴发, 进而增加人被感染的几率。牧民、从事牧业和乳业一线工作的员工、搞相关研究的实验人员等经常接触牲畜或布鲁氏杆菌本身的人,被感染的可能性较高。因此快速检测牛布鲁氏杆菌具有重要意义。本产品就是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测牛布鲁氏杆菌的试剂盒。
产品特点:
1.即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2.特异性高,引物是根据牛布鲁氏杆菌高度保守区设计,不会扩增其他细菌。
3.引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。
4.提供无传染性的 PCR 阳性对照,便于区分假阴性样品。
5.一管式操作,荧光 PCR 检测,不容易产生环境污染。
6.本产品只能用于科研,本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。
牛布鲁氏杆菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)包装规格及成分:
编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
2×qPCR MagicMix | 0.5 mL(棕色) |
试剂二 |
荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL(黄盖) |
试剂三 |
牛布鲁氏杆菌染料法 qPCR 引 物混合液 |
100 μL(白盖) |
试剂四 |
牛布鲁氏杆菌染料法 qPCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL(黄盖) |
试剂五 | 核酸释放剂试用装 | 20 次(1mL、绿盖) |
试剂六 |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂:DNA 模板
使用方法:
一、制备标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头, 下同)。
3.在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(其浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7.用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送 20 次免DNA 提取的天净沙核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为PCR 模板,省略了 DNA 提取步骤。
三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
成分 |
N+2 个 样品管 |
PCR 阴性 |
标准曲线 |
2×qPCR MagicMix |
10 μL |
10 μL |
各10 μL |
2×qPCR MagicMix |
2 μL |
2 μL |
各2 μL |
自备 10×ROX (见注) |
2 μL |
2 μL |
各2 μL |
N+2 个待测样品 DNA 模板 |
6 μL |
不加 |
不加 |
自备超纯水 |
不加 |
6 μL |
不加 |
第 7 步所得标准曲线样品稀释液 |
不加 |
不加 |
各 6μL(2 号样到 |
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照,其他荧光PCR 仪器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000 、RotorGene 6000 和 LightCycler480 ) 不需要使用ROX,则用水替代。
11.盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化)。
四、荧光定量 PCR 反应参数
过程 |
温度 |
时间 |
预热 |
50℃ |
2 min |
预变性 |
95℃ |
10 min |
PCR 反应 |
95℃ |
15 sec |
60℃ |
1 min(采集 SYBR 通道的荧 |
|
按仪器预设程序进行溶解曲线分析 |
五、数据处理
12. 设定 60℃-96℃范围的融解曲线分析,排除假阳性。
13. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。
14. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大 于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该 小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小 于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。
牛布鲁氏杆菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)相关产品:
产品名称 |
方法 |
产品规格 |
价格 |
牛布鲁氏杆菌LAMP试剂盒 |
LAMP |
50次 |
2490 |
牛布鲁氏杆菌PCR试剂盒 |
PCR |
50次 |
1990 |
牛布鲁氏杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 |
染料法 |
50次 |
2490 |
牛布鲁氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
探针法 |
50次 |
2990 |
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