非洲柑桔黄龙病菌PCR试剂盒

非洲柑桔黄龙病菌PCR试剂盒

英文名称：Candidatus Liberobacter Africanum PCR Kit
非洲柑桔黄龙病菌（Candidatus Liberobacter Africanum）是一种类菌体，柑桔感染黄龙病后，全年均可发生，一般以夏梢和秋梢发病最多，其次是春梢。新梢的症状是叶片表现黄化和黄绿相间的斑驳。在叶片凋落后，枝梢上新长出的叶片表现缺素状的花叶。病梢变短、生势衰弱，病叶黄厚、变小，且易脱落，形成枯枝。开花不适时，花开的多、落得多。果小而畸形，或红鼻果。后期，根部往往表现为小根腐烂。此菌可以侵染芸香科柑橘属和金橘属植物，引发症状。在田间未见枳发病，仅枳橙发病。通过菟丝子，此菌可以侵染长春花。在自然界，芸香科蚝壳刺属和木苹果属植物可能受此菌侵染，九里香属植物常见着生大量传播柑橘黄龙病的柑橘木虱，但其体内未见病原菌。，因此非洲柑桔黄龙病菌检测具有重要的意义。

产品特点：

1.即开即用，用户只需要提供细菌DNA模板。

2.引物经过精心优化，专一性强，只扩增非洲柑桔黄龙病菌。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5.本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次。

6.本产品只能用于科研。

非洲柑桔黄龙病菌PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（亮黄盖）
试剂二	超纯水	1 mL（蓝色）
试剂三	非洲柑桔黄龙病菌PCR引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	洲柑桔黄龙病菌PCR阳性对照	100 μL（黄盖）
试剂五	DNA释放剂试用装	50次（试用装）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂：DNA 模板


使用方法：

一、样品DNA的制备

1. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
2. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout或柱式细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。

二、设置PCR反应（40 μL体系）

1. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：
2. 按下表设置PCR反应：

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
非洲柑桔黄龙病菌 PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品DNA模板	各18 μL	-	-
样品制备阴性对照	-	18 μL	-
样品制备阳性对照	-	-	18 μL

 

过程	温度	时间
预变性	94℃	5 min
PCR反应 （35个循环）	94℃	20 sec
	58℃	20 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
取10-20 μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为208bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。

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