亚洲柑桔黄龙病菌PCR试剂盒

亚洲柑桔黄龙病菌PCR试剂盒

英文名称：Candidatus Liberobacter Asiaticum PCR Kit
亚洲柑桔黄龙病菌（Candidatus Liberobacter Asiaticum）是一种类菌 体，柑桔感染黄龙病后，全年均可发生，一般以夏梢和秋梢发病最多，其次是 春梢。新梢的症状是叶片表现黄化和黄绿相间的斑驳。在叶片凋落后，枝梢上 新长出的叶片表现缺素状的花叶。病梢变短、生势衰弱，病叶黄厚、变小，且 易脱落，形成枯枝。开花不适时，花开的多、落得多。果小而畸形，或红鼻果。 后期，根部往往表现为小根腐烂。此菌可以侵染芸香科柑橘属和金橘属植物， 引发症状。通过菟丝子，此菌可以侵染长春花。在自然界，芸香科蚝壳刺属和 木苹果属植物可能受此菌侵染，九里香属植物常见着生大量传播柑橘黄龙病的 柑橘木虱，但其体内未见病原菌。因此亚洲柑桔黄龙病菌检测具有重要的意义。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增亚洲柑桔黄龙病菌。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。

亚洲柑桔黄龙病菌PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	十孔盒包装
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	亚洲柑桔黄龙病菌 PCR 引物 混合液	100 μL（白盖）
试剂四	亚洲柑桔黄龙病菌 PCR 阳性 对照（1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	DNA 释放剂（试用装）	20 次（1mL、绿盖）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备 1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 50 次免 DNA 提取的天净沙 DNA 释放剂，本产品的裂解液 可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。其使用手册可从本公司 网站 www.tiandz.com 通过搜索产品名称天净沙 DNA 释放剂或产品编号 130982 下载。 二、设置 PCR 反应（40 μL 体系） 3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照 PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL 亚洲柑桔黄龙病菌 PCR 引 物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - - 样品制备阴性对照 - 18 μL - 样品制备阳性对照 - - 18 μL
按下表设置 PCR 反应： 过程 温度 时间 预变性 95℃ 5 min PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 30 sec 55℃ 30 sec 72℃ 30 sec 最后延伸 72℃ 10 min 三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 237bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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