说明
应用
SILu™ MAB K1稳定同位素标记通用单克隆抗体已用于掺入多肽样品,分析制备重现性。
特点和优势
通用肽序列定位
FNWYVDGVEVHNAK重链(IgG1)
VVSVLTVLHQDWLNGK 重链(IgG1、IgG3、IgG4)
GFYPSDIAVEWESNGQPENNYK 重链(IgG1、IgG4)
SGTASVVCLLNNFYPR 轻链(κ)
VDNALQSGNSQESVTEQDSK 轻链(κ)
DSTYSLSSTLTLSK 轻链(κ)
SILu™Mab已通过基于MRM的LC-MS/MS分析被验证为复杂生物基质中相关生物治疗药物定量的内标。
SILu™Mab产生0.1 μg/mL至1000 μg/mL的可重复线性曲线,无需对目标样品进行富集或剔除纯化。
在同一目标衍生的多个肽之间观察到良好的一致性。
通过质谱确定标记掺入率>98%。
通过肽图谱确认序列覆盖。
外形
以含有磷酸盐缓冲盐水的冻干粉形式提供
制备说明
SILu™Mab 通用抗体标准品专门优化用作单克隆抗体及Fc融合蛋白药物的定量分析内标。由于与候选抗体在Fc区的通用序列重叠,SILu™Mab具有通用性,从而无需生产候选抗体特异性内标。
利用含有稳定同位素标记氨基酸的富集培养基生产的是13C6、15N4标记的精氨酸和13C6、15N2标记的赖氨酸。
重悬
当使用 0.1% 的甲酸重悬冻干产品时,SILuMab 的回收率最高。 用其他溶剂重悬可能会降低回收率。重悬后不要冷冻。
程序
将小瓶以约 10,000 x g 的速度短暂离心,在小瓶底部收集产品。
向小瓶中加入500 μL含0.1%甲酸的纯水。
轻轻颠倒样品瓶至少 5 次 混合内容物。
让小瓶在室温下静置至少 15 分钟,然后颠倒重复混匀。
分析说明
SILuMAb K1重链
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVASGFTLNNYDMHWVRQGIGKGLEWVSKIGTAGDRYYAGSVKGRFTISRENAKDSLYLQMNSLRVGDAAVYYCARGAGRWAPLGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SILuMAb K1轻链
QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDIGGYNFVSWYQQHPGKAPKLMIYDATKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGDYTPGVVFGGGTKLTVLTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
靶标重叠区域加了下划线
根据A280 使用 1.4 的消光系数(E0.1%)测定的蛋白质含量确定包装规格
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