SPL-50115离心管,PP/HDPE,15ml,架装,1

Northern blotting实验方案

交联。 5.6.10 将胶和紫外交联后的膜，在紫外灯下检测转移效率。(避免太长的紫外曝光时间) 5.6.11 将膜在-20℃保存。 5.7 探针的制备 5.7.1 在1.5 ml离心管中配制以下反应液： 模板DNA(25 ng) 　1ul Random Primer 2ul 灭菌水 11ul 总体积： 14ul 5.7.2 95°C加热3分钟后，迅速放置于冰冷却5 min。

cDNA文库组标准流程

至终浓度100µg/ml，晃动摇菌，使菌体充分悬浮，静置10min。 6.按NaOH（0.4N）：SDS（2%）--1：1的比例新鲜配制溶液Ⅱ，加入20ml溶液Ⅱ，静置3-5min。 注： 静置时间勿超过5min，提前将溶液Ⅲ置于冰盒中。 7.加入15ml冰浴的溶液Ⅲ，冰浴15-30min。 8.4℃，5000rpm，离心15min。 9.取上清于两个50ml离心管中，弃去原离心管中的沉淀。 10.每管加入0.6倍体积的异丙醇，充分混匀，室温下放置10min。 11. 20

Northern Blot实验方法

。 5．65°C加热5min使酶失活。 　　　 8. 探针的纯化及比活性测定： 1．准备凝胶：将1g凝胶加入30ml的DEPC水中，浸泡过夜。用DEPC水洗涤膨胀的凝胶数次，以除去可溶解的葡聚糖。换用新配制的TE（PH7.6）。 2．取1ml一次性注射器，去除内芯推�，将注射器底部用硅化的玻璃纤维塞住，在注射器中装填Sephadex G-50凝胶。 3．将注射器放入一支15ml离心管中，注射器把手架在离心管口上。1600g离心4分钟，凝胶压紧后，补加Sephadex G-50