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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
33
- 英文名:
Chalcone isomerase, CHI
- CAS号:
/
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/96样
微量法 100管/96样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
查尔酮异构酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一个被认识的黄酮类化合物合成相关酶,也是黄酮代谢途径中的关键酶之一。查尔酮异构酶和查尔酮合酶一起构成了黄酮类化合物生物合成的限速酶。
测定原理:
查尔酮异构酶(CHI)催化查尔酮环化形成 4,5,7-三羟基黄烷酮,通过测定381nm下的吸光度变化表示CHI的活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;用时加入20mL试剂一充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
- 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至381nm,蒸馏水调零。
- 样本测定表
CHI活性计算:
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每小时A381变化0.1为一个酶活力单位。
CHI(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.1÷T =400×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织在每mL反应体系中每小时A381变化0.1为一个酶活力单位。
CHI(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.1÷T =400×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,0.5h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。
用96孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每小时A381变化0.05为一个酶活力单位。
CHI(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.05÷T =800×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织在每mL反应体系中每小时A381变化0.05为一个酶活力单位。
CHI(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.05÷T =800×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,0.5h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。
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文献和实验磷酸核糖异构酶 ribosephosphate isomerase
亦称磷酸戊糖异构酶( phosphpentoisomera- se)。 EC5. 3. 1. 6.存在于酵母菌、动物组织及植物等,需要 Mg2 ,催化如下反应: 参与磷酸戊糖循环和还原的磷酸戊糖循环,另外在葡萄糖形成核糖的途径中也含有此酶。
磷酸戊糖异构酶 phosphopentose isomerase
亦称为核糖磷酸异构酶( ribosephosphate iso- merase)或戊糖磷酸异构酶, EC5. 3. 1. 6。是存在于酵母和哺乳类组织中的酶,需要 磷酸支路有关的酶,为 B. L. Horecker( 1951)所发现,对这个途径研究的进展,起了很大的推动作用。
异构酶 isomerase 亦称异构化酶,是催化生成异构体反应的酶之总称。是酶分类上的主要类别之一。根据反应方式而分类。( 1)结合于同一碳原子的基团的立体构型发生转位反应(消旋酶、差向异构酶),如 UDP葡萄糖差向酶(生成半乳糖);( 2)顺反异构;( 3)分子内的氧化还原反应(酮糖 -醛糖相互转化等),如葡萄糖磷酸异构酶(生成磷酸果糖);( 4)分子内基团的转移反应(变位酶),如磷酸甘油酸变位酶;( 5)分子内脱去加成反应(数字为酶编号的第 2位数字)。其作用方式多种多样,已知
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