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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
69
- 英文名:
glycollic oxidase, GO
- CAS号:
/
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/96样
微量法100T/96S
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.1)是植物光呼吸代谢中的关键酶,也是光下合成草酸的关键酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。
测定原理:
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和盐酸苯/肼反应生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存,临用前加5mL双蒸水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:液体2mL×1支,4℃保存。
酶液提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g, 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定操作表:
| 测定管 | |
| 样本(μL) | 10 |
| 试剂一(μL) | 130 |
| 试剂二(μL) | 40 |
| 试剂三(μL) | 20 |
| 充分混匀,立即于微量石英比色皿/96孔板中测定324nm处10s和190s吸光值A1和A2,△A=A2- A1 | |
酶活性计算公式:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性(nmol/min /mg prot)= ×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 392×△A÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克组织每分钟氧化1 nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性(nmol/min /g 鲜重)= ×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T= 392×△A÷W
ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数:17L/mmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,3min
b. 用96孔板测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性(nmol/min /mg prot)= ×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 784×△A÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性(nmol/min /g 鲜重)= ×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T= 784×△A÷W
ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数:17L/mmol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,3min
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文献和实验甲基红试剂盒、HB8281 V-P试剂盒、HB8279 Kovacs氏靛基质试剂盒 铜绿假单胞菌 HB5187绿脓菌素测定培养基(PDP)、HB2100氧化酶试纸、HB8484假单胞菌产荧光色素培养基 枯草芽孢杆菌 HB8300芽孢染色液 白色念珠菌 HB7015念球菌显色培养基、HB0236-1 1%吐温80-玉米琼脂
【信息】Northstar BioProducts(NSBP)
/mg, ≥5 units/mL M.W.: ~70,000 (SDS-PAGE) 其它酶(Miscellaneous Enzymes)主要包括:Lipase(脂肪酶)、Protease(蛋白酶)、Esterase(酯酶)、Collagenase(胶原酶)、Enzymatic Deglycosylation Kit(酶糖基化试剂盒)、Oxidase(氧化酶)、Phospholipase(磷脂酶)、Thermolysin(嗜热菌蛋白酶)、Uricase(尿酸
3)细胞色素C的定位检测 细胞色素C作为一种信号物质,在细胞凋亡中发挥着重要的作用。正常情况下,它存在于线粒体 内膜和外膜之间的腔中,凋亡信号刺激使其从线粒体释放至细胞液,结合Apaf-1 (apoptotic protease activating factor-1)后启动caspase级联反应:细胞色素C/Apaf-1复合物激活caspase-9,后者再激活caspase-3和其它下游caspase。细胞色素C氧化酶亚单位Ⅳ(cytochrome c oxidase subunit
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