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乙醇酸氧化酶(glycollic oxidase, GO)试

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  • XY-SH094
  • 国产
  • 2025年12月11日
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      69

    • 英文名

      glycollic oxidase, GO

    • CAS号

      /

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/96样

    乙醇酸氧化酶(glycollic oxidase, GO)试剂盒说明书
                                                    微量法100T/96S

        意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
    测定意义:
    乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.1)是植物光呼吸代谢中的关键酶,也是光下合成草酸的关键酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。

    测定原理:
    乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和盐酸苯/肼反应生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。

    自备实验用品及仪器:
    天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)

    试剂组成和配制:
    提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
    试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。
    试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存,临用前加5mL双蒸水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
    试剂三:液体2mL×1支,4℃保存。

    酶液提取:
    按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

    测定操作表:
     
      测定管
    样本(μL 10
    试剂一(μL 130
    试剂二(μL 40
    试剂三(μL 20
    充分混匀,立即于微量石英比色皿/96孔板中测定324nm10s190s吸光值A1A2,△A=A2- A1

    酶活性计算公式:
    a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    1.按照蛋白浓度计算
    酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
    GO活性(nmol/min /mg prot= ×V反总÷V×Cpr÷T= 392×△A÷Cpr
    2.按照样本质量计算
    酶活性定义:每克组织每分钟氧化1 nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
    GO活性(nmol/min /g 鲜重)= ×V反总÷V×W÷V样总)÷T= 392×△A÷W
    ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数:17L/mmol/cmd:比色皿光径,1cmV反总:反应总体积,0.2mLV样:反应中样本体积,0.01mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,3min

    b. 96孔板测定的计算公式如下
    1.按照蛋白浓度计算
    酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
    GO活性(nmol/min /mg prot= ×V反总÷V×Cpr÷T= 784×△A÷Cpr
    2.按照样本质量计算
    酶活性定义:每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
    GO活性(nmol/min /g 鲜重)= ×V反总÷V×W÷V样总)÷T= 784×△A÷W
    ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数:17L/mmol/cmd:比色皿光径,0.5cmV反总:反应总体积,0.2mLV样:反应中样本体积,0.01mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,3min

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