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99
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上海源叶生物科技有限公司
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现货
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文献和实验1,透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。主要用于更换蛋白质的缓冲液,有透析袋即可,不需要特殊的仪器。2,冷冻干燥浓缩法这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既使蛋白质不易变性,又保持蛋白质中
PPV细胞培养物,反复冻融3次,4℃, 8000r/min,离心30min,取上清,向上清液中缓慢加入NaCI和PEG-6000至终浓度0. 5mo1/L和10%,搅拌均匀,用lmol/LNaOH调pH至8.0,4℃冰箱过夜。10000r/min离心30min,弃上清,用0.05mol/L,pH7.6Tris-HC1缓冲液3倍量稀释沉淀,抽提3次,3次上清液合并,19500r/min离30min,取上清,加入少许双抗,-20℃保存备用。用0.5%豚鼠红细胞在4℃下测定血凝价,并采用Lowry法检测
为横座标,绘制洗脱曲线。(7)合并、浓缩将洗锐峰的上坡段与下坡段各管收集液分别进行合并,以peg(mw6000)浓缩至所需体积,加入0.02% NaN3防腐,于4℃保存备用。长期保存时应贮于-40℃冰箱。(8)a-50凝胶的再生 在柱上先以2mol/l NaCl洗脱蛋白至流出液的OD 280nm二、注意事项1、柱的选择:从理论上说,只要柱足够长,就能获得理想的分辨率,但由于层析柱流速同压力梯度有关,柱长增加使流速减慢,峰变宽,分辨率降低。柱的直径增加,使流体流动的不均匀性增加,分辨率明显下降。2、纯化







