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99
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上海源叶生物科技有限公司
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50ml
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文献和实验(1)丙烯酰胺液溶 称取丙烯酰胺22.2g与双丙烯酰胺0.6g,溶于100ml水中,贮于褐色瓶中低温保存。(2) 凝胶缓冲液 称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)8.82g 、磷酸氢二钠(Na2HPO4 ·12H2O)51.55g与十二烷基硫酸钠2.0g,加水至1000ml(若有沉淀析出,可加温至37℃溶解)。(3)电泳缓冲液 将凝胶缓冲液稀释1倍。(4)染色液 称取25mg考马斯亮蓝R,溶于57%乙醇与9.2%醋酸混合液100ml中。(5)脱色液 取无水乙醇75ml,加冰醋酸50ml,用水
)、刻度试管5.0m1(×18)、 吸管0.10mL(×l)、0.50mL(×4)、l.0mL(×2)、 5.0m1(×l)、电子天平、722 型(或7220 型)分光光度计、容量瓶10mL(×l)。 原料 卵清蛋白或其他蛋白质样品 试剂 1. 2%卵清蛋白液:称取0.5g 卵清蛋白,溶于蒸馏水①(为了减少蛋白质变性,溶解时只能用玻棒轻缓搅动。)离心去除不溶物,取上清液加水稀释至25mL 。 2. 尿素(A.R.):粉末状。 3. 半恍氨酸盐酸
质亚基带上大量负电荷,掩盖了蛋白质各种亚基间原有的电荷差异。亚基的构象均呈长椭圆棒状,各种蛋白质亚基-SDS复合物表现出相等的电荷密度。在电场中其迁移速率仅与亚基分子质量有关,因此,SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳可以进行蛋白质亚基分离,并用来测量蛋白质亚基的分子质量。三、仪器、试剂和材料1.仪器( 1)稳压稳流电泳仪( 2)垂直板电泳槽( 3)微量注射器( 4)烧杯50ml X2( 5)白瓷盘( 6)脱色摇床( 7)吸管0.5ml X 2 ,5mlx2,10mlx3( 8)真空泵( 9)台式高速
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