MDCK[NBL-2](狗肾细胞)

实验操作步骤：  
a．采用认可的方案处死啮齿动物。    
b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。  
c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。   
d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。   
e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。
商品属性：

产品名称	规格	形态
MDCK[NBL-2](狗肾细胞)	T25瓶	上皮细胞样

商品介绍：

基本属性	细胞名称：MDCK[NBL-2](狗肾细胞) 细胞别称：MDCK (NBL-2); NBL-2; Madin-Darby Canine Kidney; Madin Darby Canine Kidney 细胞简介：MDCK(NBL-2)细胞是由S·H·Madin和N·B·Darby在1958年9月从一只外观正常的成年雌性英国小猎犬的肾分离得到的。MDCK(NBL-2)细胞角蛋白阳性，被用于研究β-粥样蛋白前体的处理及其蛋白水解产物。MDCK(NBL-2)细胞是一种合适的转染宿主，可以用于毒理学和工业生物技术研究，也可以应用于流感研究。 细胞形态：上皮细胞样 生物安全等级：1 收录：ATCC 来源：肾；自发永生；雌性 培养条件：EMEM(MEM+NEAA)+10% FBS+1% P/S 培养环境：空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5%
培养操作	换液周期：2-3天 培养基体积：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml 传代比例：1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 传代方法：1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 注意事项：不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
冻存操作	冻存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); 冻存规格：200-300万/ml，1ml每管 冻存方法：1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 注意事项：冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备  
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
 


 
注意事项：
1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，
避免开盖时试剂损失。
3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗
并彻底清除残留清洁剂。
6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
1瓶 U27株 U27 低温运输和保存革兰氏染液(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)/Gram Stain Solution(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)进口、国产Gram Stain Solution(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)50毫升×4细菌革兰氏染色
250mL Sodium Borate Buffer（硼酸钠缓冲液）,0.5M,pH8.5   Sodium Borate Buffer,0.5M,pH8.5   常温保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Serpin B5
GN增菌液颗粒 Gram Negative Enrichment Broth 250g 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Latent-transforming growth factor beta-binding protein 4
1瓶 MDA-MB-415株 MDA-MB-415 低温运输和保存 78-5000 pg/mL 人鞘氨醇裂合1( SPL)ELISA试剂盒
100 μL Paclitaxel（ TAXOL ）（紫杉醇） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
双料乳糖胆盐发酵培养基管（含小倒管） Double Lactose Bile Ferment Broth 10ml*20支 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-18
10g 葡聚糖 T-40 Dextran T-40 室温保存
10次 一管式双链cDNA合成试剂盒 One-Tube ds cDNA Synthesis Kit -20℃保存 0.156-10 ng/ml 人凝血噁烷A合成(TXA synthase)ELISA试剂盒
1瓶 SW13[SW-13]株 SW13[SW-13] 低温运输和保存
1.5mL miRNA尿素-PAGE上样液,6× miRNAoN -20℃保存 0.94-60 ng/mL ELISA Kit for Human Protein ripply3
50次 一站式磁珠法全血mRNA提取试剂盒   0.312-20 ng/mL 人晶状体蛋白αA(CRYαA)ELISA试剂盒
MDCK[NBL-2](狗肾细胞)定量PCR扩增检测试剂盒  
HHV6-A（HUMAN HERPESVIRUS 6-A）病毒  2次
标准曲线定量PCR扩增检测试剂盒  
通用型HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒定性检测试剂盒  20次
细胞HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒定性检测试剂盒  20次
组织HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒定性检测试剂盒  20次
通用型HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒  20次
体液HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒定性检测试剂盒  20次
定量PCR扩增检测试剂盒  
细胞HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒  20次
定量PCR扩增检测试剂盒  
组织HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒  20次