我们都知道流式在做一些表达量低或者难分群的指标时要使用同型对照,那么有没有一种情况,客户只买同型,却不买一抗呢?今天就来给大家介绍一下抗体药公司都在用的同型对照。
- 最初开发的单克隆抗体均为鼠源单抗,鼠源单抗常常会遇到免疫排斥、过敏反应等问题。随着嵌合单克隆抗体、人源化单克隆抗体和全人单克隆抗体获得批准,用于体内及细胞实验的人源化同型对照在各种抗体药公司中的需求量也越来越大。
- Biolegend提供Ultra-leaf的功能学抗体,有IgG1,IgG2,IgG4各种亚型,效果好于IgG,内毒素含量低,且不含叠氮化物的人源化同型对照,能协助排除实验失败的原因,增加实验的可信度。
- 经百济、齐鲁制药验证,实验效果较好,且备有现货,欢迎大家转发
抗体是能特异性识别抗原的蛋白分子,在免疫应答过程中具有不可或缺的重要作用,其参与多项生理进程,如中和毒素、激活细胞、阻断超敏反应等。而随着潜在治疗靶点或细胞功能信息的不断刷新,于体内外进行生物学功能实验已成为常规的实验手段,而实验的开展,自然就需要应用各类能执行或引发不同生物进程的功能学抗体。低内毒素,不含叠氮化物,在评估全人源化抗体、人源化抗体或嵌合抗体时,可用为对照。
抗体药物是生物技术制药领域的一个重要方面。抗体具有识别抗原的特异性,因而利用抗体诊断与治疗疾病,如恶性肿瘤、自身免疫性疾病是医药研究者长期以来追求的目标。自1986年第一个治疗性抗体进入临床以来,治疗性抗体得到了迅速的发展。
抗体药物从发现到进入临床应用,经历了曲折而又漫长的历程。随着嵌合单克隆抗体、人源化抗单克隆抗体和全人单克隆抗体获得批准,用于治疗各种疾病的单克隆抗体的批准率和市场占有率急剧增加。
最初开发的单克隆抗体均为鼠源单抗体,鼠源抗体在给病人服用过程中常常遇到一些问题:如免疫排斥,免疫排斥可能导致抗体药从病人体内清除,从而降低疗效。尤其治疗慢性疾病需要长期服用的情况下,鼠源单抗药在后续注射时疗效甚微。除此之外,有某些个体中,也有可能会导致过敏反应。因此之后使用人的序列取代小鼠单抗的固定区域,产生了嵌合抗体。而人源化单克隆抗体则是通过将除小鼠抗原结合的互补决定域外的所有序列替换为人的序列来开发的。而全人源单克隆抗体是将人类序列取代了整个啮齿类序列。
在抗体药的研发过程中,必然少不了对照的身影响。对照不仅能帮我们排除实验失败的原因,也能佐证实验结果的可靠性,增强实验的可信度。Isotype Control抗体通常被设计用于不结合动物体内存在的蛋白或者细胞相关蛋白,但是仍保持其非特异性结合的特点。BioLegend可提供0.2μm过滤灭菌、低内毒素、无叠氮化合物的人源化同型对照,在评估全人源化抗体、人源化抗体或嵌合抗体时,可用为对照。
阿尔茨海默病单抗药物对照
骨髓细胞表达的触发受体(TREM2)的遗传变异与早发型和晚发型阿尔茨海默病(AD)有关,作者开发了一系列用于治疗的单克隆抗体,可与人类和小鼠TREM2的细胞外结构域结合,促进细胞增殖,β样淀粉蛋白/凋亡神经元的摄取等。在体内,该抗体可以靶向膜结合和可溶的TREM2,通过诱导小胶质细胞激活和减轻慢性神经炎症来改善认知功能。如下图所示,与对照组IgG相比,Ab-T1可以增强小胶质细胞对标记凋亡神经元的摄取。
PD-1单抗药物对照
免疫检查点抑制剂PD-1/PD-L1是肿瘤免疫治疗中最经典的免疫检查点。PD-1和PD-L1的结合可以通过启动下游的胞内信号通路,导致T细胞的死亡。下图中则使用了human IgG4作为尼鲁单抗的对照。实验流程如下:在获得肿瘤组织与患者外周血后,将单细胞悬液加入培养板中,在培养板中提前包被上肿瘤基质蛋白,并加入自体血清及外周血单个核细胞。将尼鲁单抗及对照药物(IgG4)引入培养体系中,观察48或72h。在体外培养过程中,进行如下不同表型反应分析:细胞因子分析、IHC和流式。
与对照组相比,Th1相关通路在药物作用下的激活情况,如培养上清中IFN-g的浓度,方框表示IFNg表达最高和最低的患者样本,并分别检测其培养上清中IL-12p70的浓度变化,肿瘤组织中CD8的表达情况,可以看出药物组与对照组有明显的差异。
除使用免疫检查点抑制剂重新激活被抑制的肿瘤特异性T细胞以外,还有一些其它方法可诱导CD8+T细胞杀伤肿瘤细胞,如刺激多克隆T细胞对肿瘤的杀伤活性。使用双特异性T细胞衔接器分子(BiTE),同时结合TCR复合物和肿瘤相关抗原也可用于杀伤肿瘤。BiTE分子对血液肿瘤已被证实是有效果的,目前正在探索作为实体肿瘤的免疫疗法。作者发现人CD45RA+CCR7-CD8+T细胞亚群对BiTE刺激高度敏感,并且表达许多独特的抑制受体,包括leukocyte Ig-like receptor B1(LILRB1)。LILRB1和PD-1在不同的CD8+T细胞群中表达,表明在调节抗肿瘤反应中有不同的作用。将LILRB1与其配体HLA-G结合在肿瘤细胞上可以显著抑制BiTE分子诱导的CD8+T细胞活化,阻断LILRB1和PD-1比单独治疗诱导的CD8+T细胞活化更强,LILRB1作为人类CD8+效应T细胞的负调节因子,阻断LILRB1是一种增强BiTE分子治疗肿瘤活性的独特策略。
实验流程如下:分离PBMC后,进行细胞培养;并分离T细胞,使用anti-CD3(OK3, 5ug/ml)和CD28(CD28.2, 2ug/ml)激活,加入10ug/ml recombinant human PD-L1(Cat#762506)或相同用量的human IgG1 isotype control Ab(Cat#403501)培养48h,结果发现:
在PD-1阻断的条件下与非阻断相比,激活CD8+TEM可导致LILRB1+效应细胞频率增加,而PD-1的表达没有明显改变。并且,促进CD8+T细胞效应分化功能的细胞因子,如IL-2和IL-15,也可以增加LILRB1+T细胞的频率。增强CD8+T细胞效应,而非单独激活TCR的信号可以促进LILRB1+TEFF的分化。与只表达PDL1或HLA-G的细胞相比,目标细胞同时表达HLA-G和PD-L1对BiTE分子诱导的CCR7-CD8+T细胞的杀伤活性具有更好的抗力。
随着全人源单克隆抗体的使用,疗效和安全性大大提高。免疫原性反应、细胞因子风暴和失败的概率大大降低。在中国起步较晚,费用仍是它的一个限制因素,但是随着生的仿制药获得市场批准,单克隆抗体成本下降,随着时间的推移,可承受性和使用量将增加。在标准治疗仍无法控制的许多疾病中,单克隆抗体仍有巨大的市场潜力。在评估全人源化抗体、人源化抗体或嵌合抗体时,使用人源化抗体作为对照,可提供更可靠的实验结果。