- ￥3490
- 博尔森/BIOESN
- BES236515P
- 中国
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Influenza Virus A
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
英文名称：Influenza Virus A
中文名称：甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
【包装规格】
50T/盒
【预期用途】
本产品不提供活体样品做阳性对照，仅提供人工合成的特异性 DNA 片段标准品作为阳性对照，仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗用途。它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型高度保守区设计，不会跟其他病毒 DNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
【检验原理】
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，针对甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型的基因高度保守区域设计特异性引物，用荧光 PCR 技术对甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型的核酸进行体外扩增检测，在反应体系中含甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型核酸模板的情况下，PCR 反应得以进行并释放荧光信号，利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性、定量分析。
【试剂组成】
| 名称 | 规格 |
| 甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型扩增液 | 100μL×1管 |
| 甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型反应液 | 900μL×1管 |
| 甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型阳性质控品 | 50μL×1管 |
| 阴性质控品 | 50μL×1管 |
| 说明书 | 1份 |
2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
- 自备：无 DNA/RNA 酶的 1.5mL 离心管，0.2mL PCR 反应管，滤芯吸头(规格:10μL，200μL，1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器。
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【样品要求】
1. 根据实际情况可采取采取全血、血清、血浆，口腔样本，唾液、咽喉部鼻孔眼部和病毒培养物作为检测样本，具体参考《临床微生物样本采集规范》。
2. 应避免样本间交叉污染，样本采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃以下。
【样品保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
取待检测样本 200ul，加入 1.5ml 离心管中，用 DNA 核酸提取试剂盒进行提取即可。
1.2 RNA 提取
根据您实验室的具体情况和样品类型，选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠，我们建议使用商品化的试剂盒进行提取，严格按照对应试剂盒说明书进行操作，样本核酸提取过程中应避免污染，提取好的模板样品如不能立即检测，建议-15℃以下保存。
推荐采用我们公司研发生产的RNA提取试剂盒：RaPure病毒RNA提取试剂盒
2. 试剂配制（试剂准备区）
2.1 从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温（20～25℃），注意避免强光照射，待完全溶解后振荡混匀并低速离心 10 s，使用低吸附吸头分液取样，避免试剂损失和
浪费。
2.2 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型反应液 | 甲型流感（禽流感）病毒H5N6亚型扩增液 |
| 用量（样本数为N） | 19μL | 1μL |
2.4 盖紧八联 PCR 反应管盖， 并注意做好相应标识（请标记在八联 PCR 反应管盖两端突出部位，切勿标记在八联 PCR 反应管盖中间，以免影响信号采集）。将 PCR 反应管转移至样本准备区，剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心，核酸加样过程中应避免污染。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择：检测通道 SG，荧光染料法(SYBR Green I)，请勿选择 ROX 参比荧光。
4.3 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 预变性 | 1 cycle | 50℃ | 15min | 否 |
| 2 | 变性 | 1 cycle | 95℃ | 3min | 否 |
| 3 | 退火-延伸 | 40cycles | 95℃ | 15sec | 否 |
| 60℃ | 30sec | 是 | |||
| 4 | 溶解曲线阶段 | 1 cycle | 95℃ | 使用仪器默认程序 | 是 |
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤38.0 和典型扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
6. 质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤30；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 产品性能指标
阴阳性参考品符合率：5 份阳性参考品符合率为 100％；10 份阴性参考品符合率为 100％。
最低检测限：1.0×103copies/mL。
精密度：批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数（CV）均小于等于 3%。
8. 检测方法的局限性
Ø 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
Ø 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
Ø 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
Ø 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
Ø 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
Ø 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
9. 注意事项
Ø 所有操作严格按照说明书进行；
Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
Ø 反应液应避光保存；
Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
【厂家信息】：
Ø 公司名称：上海博尔森生物科技有限公司
Ø 网址：www.bioesn.net
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验实验室检测和快速诊断的标准如《GB/T 19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.2-2004 H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.3-2004 H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》等。以上实时荧光定量PCR技术在禽流感检测方面的国家标准是该技术在当前的人感染猪流感诊断中应用的基础和前提。实时荧光定量PCR技术及在我国卫生应急中的应用要求实时荧光定量PCR技术（Real-time quantitative
人：郭元吉、王敏，联系电话：010-63534632，010-63581337，传真：（010）63534632。 五、标本检测方法 1．禽H5 病毒核酸检测 材料：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液，死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。 方法： RT-PCR，用于禽H5 亚型流感病毒的快速检测、测序及排除工作 试剂：特异性H5 及甲型流感病毒的引物、病毒RNA 提取试剂盒、逆转录酶、Taq DNA 聚合酶等试剂, 建议使用德国QIAGEN 的Rneasy Mini Kit (病毒
性禽流感 。该试剂包括检测 H5 抗原的酶联免疫试剂盒、胶体金试剂盒以及检测 H5 抗体的酶联免疫试剂盒在内，已经发展成为系列诊断试剂，既有能检测抗原的，也能检测抗体的；既能用于检测禽类，也能用于检测人；有 ELISA 法，也有胶体金法，根据不同的检测目的分别进行了试剂细化，能够满足不同检测目的的需要。该试剂具有灵敏度高、特异性好的显著特点，能及时、高效的检测出 H5N1 亚型禽流感病毒抗原或抗体，可检测标本包括排泄物、口鼻腔分泌物、鸡胚培养的完整病毒或裂解病毒以及血清，最快在 30 分钟 , 最迟
