NCI-H1299-LUC-EGFP(人非小细胞肺癌细胞-绿色荧光蛋白-荧光素酶标记)(STR鉴定正确)
产品基本信息
细胞名称:NCI-H1299-LUC-EGFP(人非小细胞肺癌细胞-绿色荧光蛋白-荧光素酶标记)(STR鉴定正确)
种属来源:人
组织来源:肺癌
形态特征:上皮细胞样
生长特性:贴壁生长
传代比例:首次传代建议1:2传代,1:2传代是1个T25瓶传2个T25瓶或2个6cm皿
培养基::RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
生长条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
puro药筛浓度:NCI-H1299-LUC-EGFP细胞puro药筛浓度为1.0 ug/ml,培养过程中可不用再添加puro,如若担心抗性随着传代时间降低,可定期用0.5 ug/ml浓度puro维持
1)细胞复苏:
1.将含有1 mLNCI-H1299-LUC-EGFP细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。
2.在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。
3.将所有NCI-H1299-LUC-EGFP细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)。
4.第二天换液并检查细胞密度。
2)传代方法:
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗NCI-H1299-LUC-EGFP细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有NCI-H1299-LUC-EGFP细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
c、将NCI-H1299-LUC-EGFP细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)冻存方法:
a、收集NCI-H1299-LUC-EGFP细胞,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据NCI-H1299-LUC-EGFP细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。