单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒紫外分光光度法

中文名称：单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒紫外分光光度法
货号：YLK0124
测试方法：紫外分光光度法
产品规格：50管/48样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义： MDHAR 催化 MDHA 还原生成 AsA，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。

测定原理： MDHAR 催化 NADH 还原 MDHA 生成 AsA 和 NAD+，NADH 在 340 nm 有特征吸收峰， 但是 NAD+没有。通过测定 340 nm 光吸收下降速率，来计算出 MDHAR 活性。

实验中所需仪器及设备： 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水

试剂组成和配置： 试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。 试剂二：液体 50mL×1 瓶，室温保存。 试剂三：粉剂×1 瓶（棕色），4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。 试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。 试剂五：液体 25μL×1 瓶，4℃保存。临用前加 5mL 试剂二充分溶解。

本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
 

粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建 议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；8000g ，4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。

MDHAR 测定操作：
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。
3. 依次在比色皿中加入 100μL 试剂三、100μL 试剂四、100μL 试剂五和 600μL 试剂二，最 后加入 100μL 上清液，迅速混匀后于 340nm 比色，记录 30s 和 150s 的吸光值 A1 和 A2， △A=A1-A2。

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