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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)
- 保质期:
12 months
- 供应商:
天津本生
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
500ml
胰蛋白酶-EDTA 溶液(0.25%:0.02%) 天津本生
产品名称胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)
REF:CC032
储运条件
-20℃保存。
产品组成
组分规格 CC032-100ml CC032-500ml
胰蛋白酶-EDTA 溶液(0.25%:0.02%) 100ml 500ml
主要成分:主要由 0.25%胰酶、0.02%EDTA 等组成,不含酚红,过滤除菌。
自备材料:
1. 微量移液器
2.PBS、Hanks 液或无血清培养液
3. 显微镜
4. 离心机
产品简介
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。肤
蛋自酶的特点还在于已经活化的胰蛋白酶,能够继续活化更多胰蛋白酶原,这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作,它会将
蛋自质水解为肽,进而分解为氨基酸,其最适温度约为37℃。
Regal的Trypsin-EDTA solution:含0.25%胰班、0.02%EDTA。该落液经过过混除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一
些组织的消化。该产品通常室温消化 Imin 左右就可以消化下大多数贴壁细胞。
使用方法(仅供参考)
1.贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌的 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
2加入少量Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min,不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液,加入含血清的完全细脚培手清,吹打下细胸,即可直接用干后续空验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
5如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心lmin,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2.组织的消化
不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验问:请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用!多谢!答:1、胰酶是0.25%,这是质量体积比,就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意,尽量不要用水来溶,因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%-0.1%,根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的,容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响,因此使用时要甚重。如果影响贴壁,但消化时必须要用,那么在用完全培养基终止消化后,可离心弃上清,再加完全培养基培养,可去除EDTA。如果对贴壁没
,一般多用的浓度是0.02% 可以用不含钙镁的平衡盐溶液溶解,水也可以然后灭菌分装,你可以用稍微量大一点的胰酶而不用EDTA,要是直接都用EDTA你的细胞要是都能消化下来,也是可以的,但是注意消化以后用HANKS 来清洗残留的EDTA。 wangruimishu 可能是我的细胞比较容易存活的原因吧,我只用EDTA消化,细胞长的还可以,只是感觉消化的慢 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄
蛋白沉淀出来。经硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀。沉淀物经水溶解并调至pH8.0,用极少量的胰蛋白酶将胰蛋白酶原激活,同时溶液中的胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原也被激活,三种酶原相互作用过程如下: 也可采用从胰脏中提取出胰蛋白酶原,利用合适的提取溶液的pH值促使胰蛋白酶原部分自溶,并通过溶液中Ca2+的环境,使胰蛋白酶原被开始自溶的少量具有活性的胰蛋白酶所激活,转变为具有活性的胰蛋白酶(胰凝乳蛋白酶原及弹性蛋白酶原亦同时被胰蛋白酶激活成有活性的酶
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