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- 齐源
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- 进口/国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Swine Annexin V-Fluorescein Apoptosis Assay Kit
- CAS号：
Swine Annexin V-Fluorescein Apoptosis Assay Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
齐源生物
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
500 Tests
产品接触：
Annexin V 是具有血管抗凝活性的钙和磷脂结合蛋白家族的成员。体外实验结果表明，它可能通过与凝血酶原竞争磷脂酰丝氨酸 (PS) 结合位点而起到抑制血液凝固的作用。在健康细胞中，PS 通常保存在细胞膜的内叶（胞质侧）中。当细胞发生凋亡时，最早可检测到的指标之一是膜不对称性的丧失。PS 不再局限于细胞膜的胞质部分，而是转移到外叶并暴露在细胞表面。
猪膜联蛋白 V-荧光素细胞凋亡检测试剂盒提供了一种经过验证的方法，可使用重组荧光素偶联的猪膜联蛋白 V 和碘化丙锭 (PI) 快速轻松地区分两个垂死细胞群和活细胞。具有完整细胞膜和表面暴露 PS 的细胞（细胞凋亡的一个显着特征）将对 Annexin V-荧光素染色呈阳性。PI 包含在试剂盒中，用于识别失去质膜完整性的垂死晚期凋亡细胞。这些细胞将被膜联蛋白 V-荧光素和碘化丙啶（绿色和红色荧光）双重标记。具有完整质膜的活非凋亡细胞将排除 PI，并且不会被膜联蛋白 V-荧光素探针染色，假设没有治疗或细胞周期相关事件暂时暴露正常内化的、带负电荷的 PS 实体。该试剂盒还包括一种特殊配制的钙基结合缓冲液，这是 Annexin V 结合发生所必需的。使用流式细胞仪分析结果。
目标 ：细胞凋亡
激发/发射 ：膜联蛋白 V-荧光素 – 494 nm/521 nm PI – 536 nm/617 nm
分析方法 ：流式细胞术
样本类型 ：细胞培养
贮存 ：2-8℃
操作步骤：
1、准备样品和对照。
2、用 DiH2O 按 1:10 稀释 10X 结合缓冲液。
3、在冰冷的培养基或 PBS 中洗涤细胞两次，然后以 5 x 105 – 1 x 106 个细胞/mL 重悬在冰冷的 1X 结合缓冲液中。
4、在 1 mL 膜联蛋白重构缓冲液 1X 中重构猪膜联蛋白 V-荧光素。
5、在 PBS 中按 1:5 稀释重组膜联蛋白 V-荧光素。
6、以约 1:10 的比例将稀释的膜联蛋白 V-荧光素添加到每个样品中。
7、在 PBS 中稀释 PI 1:10。
8、在 ~1:20 时将稀释的 PI 添加到每个样品中。
9、在冰上孵育 15 分钟并避光。
10、向每个样品中添加 400 µL 1X 结合缓冲液。
11、用流式细胞仪分析。膜联蛋白 V-荧光素在 494 nm 激发并在 521 nm 发射。PI 在 536 nm 激发并在 617 nm 发射。
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文献和实验易造成细胞膜损伤而出现细胞坏死的假阳性，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-荧光素的结合从而干扰对于细胞凋亡的检测。同时，胰酶细胞消化液中应尽量不含EDTA，因为EDTA可能会影响Annexin V与磷脂酰丝氨酸的结合。 加入步骤1中收集的细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻悬浮细胞并计数。 注意：加入细胞培养液非常重要，一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清
示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
人膜联蛋白-A2(Anxa2) 酶联免疫分析（ ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中膜联蛋白-A2(Anxa2) 含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人膜联蛋白 -A2(Anxa2) 水平。用纯化的人膜联蛋白 -A2(Anxa2) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入膜联蛋白
