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BioID
邻近依赖的生物素标记鉴定(Proximity-dependent biotin identification, BioID)技术是基于生物素连接酶(Biotin ligase, BirA)的R118G突变体BirA*。BirA可在ATP存在的条件下,高效活化生物素(D-Biotin)形成生物素酰-5'腺苷酸(Biotinoyl-5'-AMP),并特异性地将生物素连接到Avi标签(GLNDIFEAQKIEWHE)的赖氨酸残基上,从而对目的蛋白进行快捷、高效的生物素标记;但由于BirA发生R118G突变,其活化的生物素酰-5'腺苷酸不再特异性修饰Avi标签的赖氨酸残基,而是可以对与其邻近的(~10nm)任意暴露在外的蛋白赖氨酸残基进行生物素标记。
图1. 碧云天邻近蛋白生物素标记质粒的工作原理图。
根据生物素连接酶来源种属的不同,BioID可以进一步分为BioID (Escherichia coli), BioID2 (Aquifex aeolicus), AirID (engineered Escherichia coli by an ancestral enzyme reconstruction algorithm with metagenomics), TurboID and mini TurboID (engineered Escherichia coli by yeast surface display)和BASU (Bacillus subtilis)。
表1.部分种类的BioID对比。
为了更好的助力大家科研,碧云天基于BioID2、AirID和miniTurboID构建了N端或C端融合的邻近蛋白生物素标记质粒及其对照质粒,供大家自主选择。
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