- ￥3500
- YLKBIO
- YLK0115
- 国产
- 2025年12月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- CAS号：
/
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
中文名称：柠檬酸合酶(CS）测试盒(微量法)
货号：YLK0115
测试方法：微量法
产品规格：100管/48样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循 环第一个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理
CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶 A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色 的 DTNB 转变成黄色的 TNB，在 412nm 处有特征吸光值。
本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、 研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水
试剂的组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：液体 20mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：液体 1.5mL×1 支，-20℃保存；
试剂四：液体 28mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存，临用前加入 1.2mL 蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器 或研钵匀浆。
② 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
④ 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 CS（此步可选做）。
⑤ 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），用于线粒体 CS 测定。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂五中加入 0.6mL 无水乙醇和 13mL 试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其 它物种）孵育 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（2）测定管：在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、220μL 试剂五和 10μL 试 剂六，混匀，37℃反应 15min 后立即测定吸光值 A1。 （3）对照管：在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、220μL 试剂四和 10μL 试 剂六，混匀，37℃反应 15min 后立即测定吸光值 A2。 （4）计算 ΔA=A1-A2，每个测定管设一个对照管。
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文献和实验相关实验
，该方法自问世以来已被广泛用于差异表达基因的克隆鉴定研究中。其基本原理是，几乎所有的真核基因mRNA分子的3’-末端，都带有一个多聚的腺苷酸结构，即通常所说的poly(A)尾巴。因此，在RNA聚合酶的作用下，可按mRNA为模板，以oligo(dT)为引物合成出cDNA拷贝。根据mRNA分子3’-末端序列末端结构的分析可以看到，在这段poly(A)序列起点碱基之前的一个碱基，除了为A的情况之外，只能有C、G、T三种可能。根据这种序列结构特征，P. Peng等人设计合成三中不同的下游引物，它由11个或12
技术资料柠檬酸合酶(CS）测试盒(微量法)
￥3500
