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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Human ADGRB3 Protein Lysate 20ug
- 规格:
瓶
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文献和实验?如果我想检测全细胞的蛋白,不分可溶性和不溶性,应该怎么做呢? waterzouyx RIPA裂解液也分强、中、弱的,要看看你的目的蛋白是否为难溶性蛋白,如果为难溶,你的沉淀中有目的蛋白也正常了。暂时没听说不溶性蛋白可以做WB的。个人认为你要求的全细胞蛋白的问题,你可以考虑用二维电泳用的蛋白裂解液,其裂解效率非常高,不溶性沉淀非常少 。另提醒下,RIPA法裂解的蛋白提取物,不能用Bradford法测定蛋白浓度的 zhangyong1980121
分蛋白,这个时间已可饱和。 4. pH值:核提取物pH值应为6.5-8.5之间,最好为7.9。 5. 一价离子强度:一价阳离子浓度是决定特异性和非特异性复合物比例的重要因素。许多非特异性蛋白质-DNA反应是离子性的,因此可以被高盐浓度所抑制。但高盐亦可与DNA的磷酸骨架反应导致DNA复合物断裂。所以若使用核蛋白粗提物,盐离子浓度最好于50-100mM之间,也有些因结构较稳定可以耐受200mM。 6. 二价离子:最多为Mg2+,其优化浓度为0-10mM,试验时可用5mM尝试。它可以加速蛋白
分装),PMSF(Amersco),Cocktaier(Merck 539134),Immobilized Glutathione(PIERCE 15160) 实验操作程序: 材料及试剂 探针蛋白与GST融合的原核蛋白,裂解的细胞蛋白,或者组织蛋白提取物 细胞蛋白裂解液,洗脱液: PBS及PBS+1%Triton-100 PBS (1L) NaCl: 8g KCl: 0.2g Na2HPO4: 1.44g KH2PO
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