人ADAMTS18蛋白质裂解物20ug

蛋白质印迹（Western blot）实验方案

缓冲液（湿转）25 mM Tris 碱190 mM 甘氨酸20% 甲醇测定 pH，pH 应为约 8.3。必要时进行调节。对于大于 80 kDa 的蛋白质，我们推荐加入最终浓度为 0.1% 的 SDS。转膜缓冲液（半干转）48 mM Tris39 mM 甘氨酸20% 甲醇0.04% SDS封闭缓冲液5% 奶粉或 BSA（牛血清白蛋白）加入 TBST 缓冲液中。混匀并过滤。过滤失败可能导致出现「斑点」，其中微小的黑色颗粒会在显色过程中污染印迹。实验步骤一、样品裂解◇ 制备细胞培养物裂解物1. 将细胞培养皿置于

磷酸化蛋白 WB 做不好？文献指出了你可能忽略的重要原因

）样品使用 SD-001(Invent Biotech, USA) 和 RIPA 缓冲液无明显差异。 然而，p-56 的磷酸化模式的结果却完全不同。使用 SD-001 的裂解物，磷酸化的 p-56 在化学刺激（T）后从基线水平（NT）增加，同时伴随着非磷酸化形式的降低，而 RIPA 缓冲液提取的样品恰恰相反。 处理的（T）样品中的磷酸化 p-56 小于基线水平（NT）， 这个观察结果与预期不一致。 虽然确切的原因不清楚，但是蛋白丢失是导致这个结果的最大可能原因。 除了提取过程中的蛋白质损失外，还发现

蛋白质翻译后修饰（PTMs)概述

蛋白质翻译后修饰 (Protein translational modifications，PTMs) 通过功能基团或蛋白质的共价添加、调节亚基的蛋白水解切割或整个蛋白质的降解来增加蛋白质组的功能多样性。这些修饰包括磷酸化、糖基化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、脂质化和蛋白水解，几乎影响正常细胞生物学和发病机制的所有方面。因此，识别和理解 PTM 在细胞生物学和疾病治疗和预防的研究中至关重要。 看到一篇 Thermo Fisher的文章，关于翻译后修饰Post