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北京云肽生物科技有限公司
罗氏Roche总部位于瑞士巴塞尔,是全球在医药和诊断领域,致力于研究并处于领先地位之一的保健集团。罗氏的诊断部门提供了du一无二的产品品种,为全世界的研究人员、医师、病人、医院和实验室提供多样化的创新测试产品及服务。罗氏诊断在全球有近19,000人员正致力于科研、发展、产品的市场运作和服务以及一体化的解决方案。
产品名称:LightCycler 480 SYBR Green I Master(Roche)
英文名称:LightCycler 480 SYBR Green I Master(Roche)
产品货号:04887352001
产品规格:10×5ml
产品说明:
概述
LightCycler® 480 SYBR Green I Master 是一种用于 PCR 的单组分热启动反应混合物。它包含 FastStart Taq DNA 聚合酶和 DNA 双链特异性 SYBR Green I 染料,用于 PCR 产物检测和表征。由于该混合物作为易于使用的多合一主试剂提供,因此反应设置只需要添加模板DNA和引物。该混合物可与不同类型的 DNA(例如基因组 DNA 或 cDNA)一起使用,适用于 LightCycler® 480 仪器上 96 孔板或 384 孔板的高通量应用。
应用
LightCycler® 480 SYBR Green I Master专为研究而设计。当与 LightCycler® 480 系统一起使用时,该试剂盒非常适合热启动 PCR 应用。结合 LightCycler® 480 系统和合适的 PCR 引物,该试剂盒可以非常灵敏地检测和定量确定的 DNA 序列。该试剂盒还可用于执行两步 RT-PCR。它也可以与热不稳定的尿mi啶-DNA糖基化酶一起使用,以防止PCR过程中的残留污染。
原则上,该试剂盒可用于扩增和检测任何DNA或cDNA靶标。
原则
LightCycler 480 SYBR Green I Master 是一种即用型反应混合物,专为在 LightCycler®® 480 仪器上应用 SYBR Green I 检测格式而设计。它用于在 96 或 384 多孔板中进行热启动 PCR。热启动PCR已被证明通过在反应开始时*大限度地减少非特异性扩增产物的形成,显着提gaoPCR的特异性和ling敏度
FastStart Taq DNA 聚合酶是一种化学修饰形式的热稳定重组 Taq DNA 聚合酶,在高达 75°C 的温度下没有活性。 该酶仅在高温下具有活性,其中引物不再非特异性结合。在循环开始之前,酶在单个预孵育步骤(95°C,5 - 10分钟)中完全激活(通过去除封闭基团)。激活不需要其他热启动技术典型的额外处理步骤。
PCR产物的产生可以通过测量SYBR绿I荧光信号来检测。SYBR Green I插入DNA螺旋(5)。在溶液中,未结合的染料表现出很少的荧光;然而,荧光(波长,530 nm)在DNA结合时大大增强。因此,在PCR过程中,SYBR Green I荧光的增加与产生的双链DNA量成正比。由于SYBR Green I染料非常稳定(在30个扩增循环中只有6%的活性损失),并且LightCycler® 480仪器的光学滤光片组与激发和发射波长相匹配,因此它是测量总DNA的shou选试剂。
在光循环仪® 480系统上进行实时荧光定量PCR期间,使用SYBR Green I进行DNA检测的基本步骤是:
- 在扩增开始时,反应混合物包含变性DNA、引物和染料。未结合的染料分子发出微弱的荧光,产生最*小的背景荧光信号,在计算机分析过程中会减去该信号。
- 引物退火后,一些染料分子可以与双链结合。DNA结合导致SYBR Green I分子在激发时发光的急剧增加。
- 在伸长过程中,越来越多的染料分子与新合成的DNA结合。如果连续监测反应,则可以实时观察荧光的增加。在下一个加热循环的DNA变性后,染料分子被释放并且荧光信号下降。
- 在每个PCR循环的伸长步骤结束时进行荧光测量,以监测扩增DNA量的增加。
为了证明只有您想要的PCR产物被扩增,您可以在PCR后进行熔解曲线分析。在熔解曲线分析中,反应混合物缓慢加热至97°C,这导致双链DNA熔解并相应降低SYBR Green I荧光。仪器持续监测这种荧光降低,并将其显示为熔解峰。每个熔解峰代表特定DNA产物的特征解链温度(Tm)(其中DNA为50%双链和50%单链)。决定dsDNA的Tm的*重要因素是该片段的长度和GC含量。如果PCR仅产生一个扩增子,则熔解曲线分析将仅显示一个熔解峰。如果存在引物二聚体或其他非特异性产物,它们将显示为额外的熔点峰。因此,检查PCR产物的Tm可以与在凝胶电泳中按长度分析PCR产物进行比较。
其他说明
仅用于生命科学研究。不适用于诊断程序。
以下是Roche品牌的部分产品目录,如需其它产品请咨询客服
03004171001 MagNA Pure LC Reaction Tip(Roche)960根
03115879001 Proteinase K 蛋白酶K(Roche原装)100mg
03143422001 Genopure Plasmid Maxi Kit Roche 1kit
03264793001 MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit(Roche) 192isolations
03358941001 MagNA Lyser Green Beads(Roche)100管/盒
03531295001 Transcriptor Reverse Transcriptase(Roche)500U
04476115001 X-tremeGENE? siRNA Transfection Reagent(Roche) 5×1 mL
04693132001 cOmplete,EDTA-free,EASYpack Roche 20tablets
04707516001 LightCycler 480 SYBR Green I Master(Roche)5*1ml
04729749001 LightCycler 480 Multiwell Plate 384 Roche 5×10 块板(含封板膜)
04729757001 LightCycler 480 Sealing Foil, 封板膜 Roche 50片/盒
04887352001 LightCycler 480 SYBR Green I Master(Roche)10×5ml
04906837001 PhosStop, 20 Tablets Roche 20tablets
04906845001 PhosSTO(Roche) 10 Tablets
04913914001 FS Universal SYBR Green Master Roche 10*5 ml
04929292001 LightCycler Capillaries (20μl) 5x 96根/盒
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05401020001 Liberase TL研究级(Roche) 10mg
05401127001 Liberase TM 研究级(Roche)100MG
05893682001 cOmplete His-Tag Purification Resin(Roche)25mL
06612601001 LightCycler 8-Tube Strips (white)(白色,带盖) 10*12根8联管
06924204001 FS Essential DNA Green Master,Roche 10*5ml
10101893001 ROCHE Acetyl-Coenzyme A 10mg
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10103578001 胶原酶A Collagenase A(Roche) 100mg
10104159001 DNase I,grade II, from bovine pancreas 100mg
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10109169001 RNase A(Roche)100mg
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10837091001 PMSF(Roche) 10g
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11093274910抗di高辛-AP,Fab片段 Anti-Digoxigenin-AP, Fab fragments 200μL
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11134515001 Protein A-Agarose Roche 5ml
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11243217001 Laminin 层粘蛋白(Roche) 1mg(2ml)
11243233001 Protein G-Agarose Roche 5ml
11277073910 DIG RNA Labeling Mixture, 10x Roche 40μl
11365193001 N-Glycosidase F N-糖苷酶 F(Roche)250U
11373242910荧光素-12-dUTP(Roche)25μL
11418467001 Chymotrypsin Sequencing Grade Roche 4 x 25 μg
11581295001 PCR Nucleotide Mix Roche 200μl
11666649001 Hybridization Bags Roche pkg of 50 bags
11681451001 NBT/BCIP Stock Solution Roche 8mL
11697471001 NBT/BCIP Ready-to-Use Tablets(Roche)20片/盒
11717472001 Hybridization Buffer(Roche) 100mL
11745832910 DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I(Roche盒
11836170001 cOmplete?, Mini, EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail 25Tablets
11858882001 HP Viral RNA Kit(Roche)1kit
11873580001 不含EDTA的cOmplete?蛋白酶抑制剂混合物(Roche)20TABLETS
12156792910 In Situ Cell Death TMR(Roche) 1kit(50tests)
12209136001 TeloTAGGG? Telomere Length Assay(Roche) 1kit
3004058001 MagNA Pure LC Medium Reagent Tub 150个
3004155001 MagNA Pure LC Tip Stand 200个
3004171001 MagNA Pure LC Reaction Tip (large) 960根 (30×32)
3010040001 PVDF Western Blotting Membrane Roche 1 roll (30 cm x 3.00 m)
4659180001 MagNA Pure Bacteria Lysis Buffer 20ml
4729692001 LightCycler 480 Multiwell Plate 96 5 x 10 块板 (含封板膜)
4913949001 FastStart Universal Probe Master 2x1.25ml
6327672001 LightCycler 8-Tube Strips (Clear, for LC Nano) 10 x 12 根8联管 (透明,带盖)
6402712001 FastStart Essential DNA Green Master(Roche)5×100反应(20μl)
04693124001 cOmplete, Mini Protease Inhibitor Cocktail 30tablets
04693159001 cOmplete, Mini, EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail 30tablets
10127698001 β-Glucuronidase/Arylsulfatase(Roche)10ml
11088815001 Collagenase B 胶原酶B(Roche) 500mg
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文献和实验Real-time quantitative polymerase chain reaction (QPCR) using the Roche LightCycler� was used to verify the expression of asparagine synthetase (ASNS) identified by microarray analysis as a target of p53 transrepression and mutant p53
罗氏推出最新款实时荧光PCR仪LightCycler® 96
系数)≤0.3%。 灵活的配置 ■ 6个检测通道,轻松实现多重PCR 。包含经典的20 μl或全新的100 μl反应体系,方式灵活。 高灵敏度 ■ LightCycler® 系统可从3pg人基因组DNA(约为一个人的基因组当量)中检出单拷贝基因。 开放式系统 ■ 支持SYBR Green I、Taqman水解探针、杂交探针和熔解曲线等多种检测模式,并可选用多数第三方供应商提供的同型号毛细管和兼容试剂。
7000,其他人都是用 taqman 探针做的,而且只是对结果进行定性分析。 我用的是 SYBR green 染料,是需要做溶解曲线的。关于设置的问题就来了,设置好 PCR 的程序以后,在程序下方有一个框框。具体我忘了,把那个框框打上勾就好了, 溶解曲线的温度是不能高于 60 度的,所以我有部分产物解链温度太高了,出来的溶解曲线只能出来半侧峰或者没有峰。 后来单位又购进了一台 ROCHE 480 lightcycleR 能设置溶解曲线的反应程序,这个问题就解决了。 阈值的调整
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