1、 准备样品:将样品和 UREA-TBE loading buffer(2X)按照 1:1混合均匀, 70℃下加热 5min。 2、 准备 1X running buffer:取 200mL的 5X TBE buffer,加入去离子水至 1L,制备成 1X TBE buffer。 3、 将预制胶装入兼容的电泳槽中,加入电泳缓冲液,再缓慢地将梳子拔出。 4、 上样前请使用移液器吸取电泳缓冲液轻轻吹打加样孔,去除加样孔内残余的胶液。 5、 上样:在梳孔内加入适当浓度和体积的样品。 6、 电泳条件:150 V, 50~90 min(电泳时间取决于凝胶浓度) 7、 电泳结束,取出凝胶,冲洗干净,按照拆胶说明(见下方),取出凝胶。 8、 将取出的凝胶置于 0、5μg/mL 的 EB染色液中,摇床染色 20-30分钟(注意,EB染色液需避光)。 9、 小心取出染色后的凝胶,置于干净的容器中,漂洗 2-3次,洗去残留的 EB染色液(EB染色液具有一定的毒性,请做好防护,若采用其他类型染色液,请参照该染色液说明书操作)。 10、将凝胶置于紫外线下进行观察或拍照,注意紫外线对人体有伤害,请做好防护措施。 拆胶: 1、 先沿侧边胶处简单划一刀(或先将玻璃板侧边多余封胶材料去除); 2、 用刀在侧边胶处,沿着玻璃板和玻璃条的缝隙切开封胶材料(箭头处),轻轻打开玻璃板; 3、 取胶时,需在凝胶和两侧玻璃条之间沿着玻璃条划一刀,防止取胶时发生粘连使凝胶破碎。 |