1、准备样品:将样品和 TBE loading buffer(5X)按照 4:1 混合均匀。 2、准备 1X running buffer:取 200mL 的 5X TBE buffer,加入去离子水至 1L,制备成 1X TBE buffer。 3、将预制胶装入兼容的电泳槽中,加入电泳缓冲液,再缓慢地将梳子拔出。 4、上样前请使用移液器吸取电泳缓冲液轻轻吹打加样孔,去除加样孔内残余的胶液。 5、上样:在梳孔内加入适当浓度和体积的 DNA 样品。 6、电泳条件:150 V, 50~75 min(电泳时间取决于凝胶浓度) 7、电泳结束,取出凝胶。取出胶板,冲洗干净,按照拆胶说明(见下方),取出凝胶。 8、将取出的凝胶置于 0.5μg/mL 的 EB 染色液中,摇床染色 20-30 分钟(注意,EB 染色液需避光)。 9、小心取出染色后的凝胶,置于干净的容器中,漂洗 2-3 次,洗去残留的 EB 染色液( EB 染色液具有一定的毒性,请做好防护,若采用其他类型染色液,请参照该染色液说明书操作)。 10、将凝胶置于紫外线下进行观察或拍照,注意紫外线对人体有伤害,请做好防护措施。 拆胶: 1、先沿侧边胶处简单划一刀(或先将玻璃板侧边多余封胶材料去除); 2、用刀在侧边胶处,沿着玻璃板和玻璃条的缝隙切开封胶材料(箭头处),轻轻打开玻璃板; 3、取胶时,需在凝胶和两侧玻璃条之间沿着玻璃条划一刀,防止取胶时发生粘连使凝胶破碎。 |