游离DNA提取试剂盒

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产品描述：

产品名称：游离DNA提取试剂盒

中文别名: Circulating Cell-free DNA Isolation Kit

描述: 试剂盒组分：

使用方法: 自备试剂：无水乙醇、异丙醇、PBS或生理盐水自备仪器及耗材：1、台式离心机（适用1.5 mL离心管，离心力可达13000g以上）2、离心机（适用15 mL离心管，离心力可达2500g以上）3、水浴锅4、真空泵5、真空收集器（推荐使用QIAGEN公司的QIAvac 24 Plus vacuum manifold，货号：19413）6、干净1.5 mL离心管一、游离DNA提取前准备工作：1、样本准备：本试剂盒可用于提取3.0 ~ 5.0 mL体积血浆中的游离DNA。（1）如果血浆体积2.0 ~ 3.0 mL，则用缓冲液PBS或生理盐水补齐至3.0 mL。（2）如果血浆体积3.0 ~ 4.0 mL，则用缓冲液PBS或生理盐水补齐至4.0 mL。（3）如果血浆体积4.0 ~ 5.0 mL，则用缓冲液PBS或生理盐水补齐至5.0 mL。2、试剂准备：（1）Buffer W1（浓缩液），使用前需补加25 mL无水乙醇，充分混匀，并在瓶上作好标记。（2）Buffer W2（浓缩液），使用前需补加80 mL无水乙醇，充分混匀，并在瓶上作好标记。二、游离DNA提取操作步骤：1、血浆样本准备好后，小心转移至15 mL离心管。2、根据待提取血浆体积大小，分别向15 mL离心管加入相应比例的Buffer PL（1×血浆样本体积）和100ul 蛋白酶K溶液：（1）3.0 mL血浆样本加入3.0 mL Buffer PL和100ul蛋白酶K溶液。（2）4.0 mL血浆样本加入4.0 mL Buffer PL和100ul蛋白酶K溶液。（3）5.0 mL血浆样本加入5.0 mL Buffer PL和100ul蛋白酶K溶液。然后颠倒混匀15 ~ 20次，确保充分混匀（需注意拧紧盖子，防止后续孵育过程液体渗出，造成样本交叉污染）。3、放置水浴锅中，56 ℃ 孵育30分钟，注意水浴锅的水位应高于15 mL离心管中液面。在上述步骤孵育过程中，将真空泵和真空收集器连接好，然后根据样本数将相应的连接器插入真空收集器的小孔中，再依次插上DNA纯化柱和储液管，DNA纯化柱收集管留着备用，整个装置确保紧密连接不漏气（取出DNA纯化柱后，需将包装剩余DNA纯化柱的自封袋密封严实，防止温湿度剧烈变化而导致DNA得率的降低）。4、步骤3结束后将样本取出，在25 ℃条件下2500g离心10秒钟。根据样本体积加入相应体积的异丙醇（0.5×血浆样本体积）：（1）3.0 mL血浆样本加入1.5 mL异丙醇。（2）4.0 mL血浆样本加入2.0 mL异丙醇。（3）5.0 mL血浆样本加入2.5 mL异丙醇。然后颠倒混匀15 ~ 20次，一定要确保充分混匀，在25℃条件下2500g离心10秒钟(加入异丙醇后，不需要置于冰水浴中孵育)。5、短暂离心后，小心将裂解后样本转入已连接好的储液管中，打开真空泵，将负压控制在 - 0.08 MPa ~ - 0.1 MPa范围内，使液体平缓流过DNA纯化柱，整个过程应观察有无液体渗漏，防止损失和交叉污染。6、待所有液体穿过DNA纯化柱后，关真空泵，小心将储液管拆下并丢弃。7、保持DNA纯化柱开盖状态，加入600ul Buffer W1，开真空泵，待所有液体流过DNA纯化柱，关真空泵。8、重复步骤7。9、保持DNA纯化柱开盖状态，加入800ul Buffer W2，开真空泵，使所有液体流过DNA纯化柱，关真空泵。10、保持DNA纯化柱开盖状态，然后小心的将DNA纯化柱拆下并放入步骤4留下的收集管中，加入800ul Buffer W2，盖紧盖子，颠倒2 ~ 3次后，25 ℃，13000g离心1分钟。11、将上述步骤DNA纯化柱取出，转入新收集管，在25 ℃，13000g离心3分钟。12、将DNA纯化柱小心取出，转入新收集管，然后小心揭开纯化柱盖子，向纯化柱中央加入50 ~ 100ul Buffer ES（提取多个样本时，每个样本加入Buffer ES后需更换滤芯枪头，防止样本的交叉污染），室温放置3分钟。13、13000g离心1分钟，收集到的液体即为提取后的血浆游离DNA，将DNA样本转入1.5 mL离心管中。如果24小时内需要使用样本，2 ~ 8℃保存即可，长期保存需放置于低于 -15℃冰箱中。三、血浆核酸沉淀纯化:无需沉淀

储存/保存方法: 本试剂盒除蛋白酶K外，应储存于室温，干燥阴凉处，有效期为12个月。 蛋白酶K溶液储存于-20℃，可根据需要分装保存，避免反复冻融。

产品用途: 本试剂盒可从血浆中高效提取高纯度游离DNA（cell-free DNA），用于后续相关PCR、next-generation sequencing（NGS）等分子生物学检测。

注意事项: 1、使用本产品前应仔细阅读说明书。
2、试剂盒中组份Buffer PL和Buffer W1（浓缩液）含有胍盐等有害物质，操作时需做好安全防护工作。
3、试剂盒中组份Buffer PL 和 Buffer W1(浓缩液)中若发现少许颗粒物，不影响使用。
4、试剂盒使用前应确保Buffer W1（浓缩液）和Buffer W2（浓缩液）已补加相应体积的无水乙醇，不能用70%乙醇替代，并充分混匀。
5、核酸洗脱液Buffer ES不建议用纯水替代。
6、建议洗脱体积为50 ~ 100 μL，洗脱体积不能低于30 μL，当用30 ~ 50 μL洗脱时，需保证洗脱液加到吸附柱的正中央，当低于50 μL洗脱时，可能导致回收率偏低。

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