病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒

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产品描述：

产品名称：病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒

描述:

采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从体液，包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯病毒DNA/RNA。病毒DNA/RNA裂解消化处理后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Carrier RNA可以从体系中轻松捕获微量病毒DNA/RNA），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR/RT-PCR分析。

产品特点：

1、不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2、节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3、配备了Carrier RNA用于充分收集特别微量病毒DNA/RNA。
4、多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒DNA/RNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern杂交等。
自备试剂：无水乙醇

产品信息：

使用方法:

提示：

1、第一次使用前请先在 10 ml 漂洗液 RW 中加入 40 ml 无水乙醇，充分混匀， 加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

操作：

1、取 20 μl 蛋白酶 K(20 mg/ml)加入新的（RNase free）1.5 ml 离心管。

2、 取 200 μl 血清等体液（需恢复到室温，不足可用 0.9% NaCl 或者 PBS 补足）转入 上述 1.5 ml 离心管，加入 200 μl Carrier RNA 工作液（为结合液 RQ 与 Carrier RNA 的混合液，配制方法如表 1 或按照公式计算），立即涡旋充分混匀。 为了保证裂解充分，样品和 Carrier RNA 工作液需要彻底混匀，可短暂涡旋。 使用的体液最多为300 μl，Carrier RNA工作液需要按照比例增加。

3、 56℃温育 15 min，不时颠倒数次混匀。

4、冷却后加入 250 μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，室温(15-25℃)放置 5 min。 如果周围环境高于 25℃，乙醇需要冰上预冷后再加入。

5、将上述混合物加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm 离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液。

6、加 500 μl 去蛋白液 RE，12,000 rpm 离心 30 sec，弃废液。

7、加入 500 μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心 30 sec， 弃废液。

8、重复步骤 7。

9、将吸附柱 RA 放回空收集管中，12,000 rpm 离心 2 min，将吸附柱置于室温放置数 分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

10、取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 的离心管中，在吸附膜的中间部位加 50 μl RNase free H2O（事先在 65℃水浴中加热效果更好），室温放置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min。如果想得到较多量的 DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中， 12,000 rpm 离心 1 min。 洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要 DNA/RNA 浓度较高，可以适当减少洗 脱体积，但是最小体积不应少于 20 μl，体积过小降低洗脱效率，减少 DNA/RNA 产量。

11、DNA 病毒可以存放在 2-8℃，若要长时间存放，可以放置在-20℃。RNA 病毒建 议最好立刻使用，否则立刻放置在-70℃备用。

储存/保存方法: 参考试剂盒，有效期12个月。

注意事项:

1、所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到12,000 rpm的传统台式离心机，如 Eppendorf 5415C或者类似离心机。
2、开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
3、结合液RQ和去蛋白液RE含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、 眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4、Carrier RNA工作液的配制如下：
（1）根据样品的数量计算所需结合液 RQ 和 Carrier RNA 溶液的体积，将结合液 RQ 与 Carrier RNA 溶液颠倒充分混匀，即得到 Carrier RNA 工作液；如果需要提取大量的样品，可根据以下公式计算：
n×0.22 ml =y ml， yml×4.5 μl/ml=z μl
n=同时提取的样品个数；
y=加入结合液 RQ 的体积；
z=加入 Carrier RNA 溶液的体积。
5、结合液 RQ 容易起泡沫，请勿使用涡旋振荡混匀。将结合液 RQ 与 Carrier RNA 溶液颠倒充分混匀，即得到 Carrier RNA 工作液，工作液在室温条件下能保存 24 小时。
6、结合液 RQ 和去蛋白液 RE 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水浴几分钟重新 溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
7、Carrier RNA 加入结合液 RQ 后，在 2-8℃最多能保存 48 小时，请现用现配。

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