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快速内切酶BglII

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  • 爱必信(absin)
  • abs60205
  • 上海
  • 2025年07月09日
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    • 英文名：

      -

    • 库存：

      12

    • 供应商：

      爱必信(上海)生物科技有限公司

    • CAS号：

      -

    • 规格：

      100rxns

    公告提醒：爱必信所有产品和服务仅用于科学研究，不用于临床应用及其他用途提供产品和服务（也不为任何个人提供产品和服务）!

     

    产品描述：

    产品名称：快速内切酶BglII

    描述: 爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点：5~15分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有105%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。
    识别位点：
    5'...A ↓ G A T C T ...3'
    3'...T C T A G ↑ A ...5'

    产品组分：

    名称 规格
    BglII 100 μl
    10× Cut Buffer 1 ml
    10× Cut Color Buffer 1 ml

    使用方法:

    1. DNA 快速酶切流程：
    ① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

      质粒 DNA PCR 产物 基因组 DNA
    ddH2O 15 μl 16 μl 30 μl
    10× Cut  Buffer 或 10× Cut  Color Buffer 2 μl 3 μl（a） 5 μl
    底物 DNA 2 μl (up to 1 μg) 10 μl (~0.2 μg) 10 μl (5 μg) 
     BglII 1 μl 1 μl 5 μl
    Total 20 μl 30 μl 50 μl
    a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10× Cut Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
    ② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
    ③ 37℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）；
    ④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。
    2. 双酶切或多酶切：
    ① 每种快速内切酶的用量为 1 μl，并根据需要适当扩大反应体系；
    ② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；
    ③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
    3. 适用于质粒的扩大反应体系：
    DNA 1 μg 2 μg 3μg 4 μg 5 μg
    BglII 1 μl 2μl 3 μl 4 μl 5 μl
    10× Cut  Buffer 或 10× Cut Color Buffer 2 μl 2 μl 3 μl 4 μl 5 μl
    Total 20 μl 20 μl 30 μl 40 μl 50 μl
    注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
    不同 DNA 中的酶切位点数量：
    λDNA ΦX174 pBR322 pUC57 pUC18/19 SV40 M13mp18/19 Adeno2
    6 0 0 0 0 0 1 11

    甲基化修饰影响：
    Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI
    无影响 无影响 无影响 无影响 序列可能重叠剪切阻断

    在不同反应缓冲液中的活性：
      Cut Buffer Thermo Scientific
    FastDigest Buffer    		 NEB
    CutSmart®
     Buffer    		 Takara
    QuickCut™ Buffer
    活性 100% 100% 100% 50%

    储存/保存方法: -20℃，有效期2年。

    技术指标: 建议反应条件：
    1× Cut 缓冲液；
    37℃温育；
    参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
    失活条件：
    80℃温育 20 min。
    质量控制：
    功能活性检测：
    最适反应温度下，在 20 μl 反应体系中，1 μl BglII 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA。
    超长时间温育检测：
    最适反应温度下，将 1 μl  BglII 与 1 μg λDNA 共同 温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。
    酶切 - 连接 - 再酶切检测：
    最适反应温度下，使用 1 μl BglII 消化底物，回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连 接产物。
    非特异性内切酶活性检测：
    最适反应温度下，将 1 μl BglII 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。
    蓝白斑检测：
    将含有单一 lacZα 基因的载体以 1 μl BglII 消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG 和 X-gal 的 LB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落， 而连接错误（即 DNA 末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于爱必信的系列限制酶而言，白色菌落比例应小于 1%。

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      RNA PolyIII 聚合酶转录终止位点，且两端分别设计酶切位点。5. pSUPER 载体进行 BglII，HindIII 的双酶切。获得线性质粒载体。6. DNA 双链和病毒载体的连接。7. 连接产物的转化。8. 测序验证 ShRNA 序列是否连接到载体。9. 将质粒转染细胞验证 ShRNA 敲减效率。以上是 shRNA 的茎环引物设计方法，在构建其它慢病毒或者腺病毒质粒时，方法是通用的。但是，对于以下几种情况：（1）不同的质粒，（2）选用不同的限制性内切酶，（3）连接质粒时选用重组或者黏性

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