- ￥1376 - 2608
- 爱必信(absin)
- 上海
- abs60270
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20°C 避光储存，避免反复冻融；有效期1年
- 保质期：
1年
- 英文名：
-
- 库存：
现货
- 供应商：
爱必信(上海)生物科技有限公司
- CAS号：
-
- 规格：
400T/200T
| 规格： | 400T | 产品价格： | ￥2608.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 200T | 产品价格： | ￥1376.0 |
| 描述 | 产品介绍： 该产品采用本司生产的化学修饰的热启动聚合酶，使用SYBR Green I嵌合荧光法进行miRNA的荧光扩增，具有高度的特异性，能够有效避免引物二聚体形成和其它形式的非特异扩增。反应缓冲液经充分优化，PCR扩增效率高，荧光信号强，拥有更高的反应灵敏度。购买该系列一套产品，我们将免费提供上下游引物设计和序列信息，使miRNA的扩增效果更有保障。 产品特点： 1.使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，可有效避免非特异扩增； 2.反应缓冲液经充分优化，PCR扩增效率高，反应灵敏度优于多家同类产品； 3.免费提供上下游引物设计和序列信息， miRNA的扩增效果更有保障。 | ||||||||||||
| 使用方法 | 操作步骤： 一、按下表配制反应体系 ： 取RNase-free离心管，配制如下混合液：2× miRNA SYBR Mastermix 10μl、 Tag Primer（10uM） 0.4ul、Specific primer（10uM） 0.4ul、Temlate DNA/cDNA 2.0ul、ddH2O to 20ul、 * 可自行设计合成miRNA正向引物，我们也可免费提供设计。 二、设置反应条件： 激活Taq 95℃ 2min；PCR循环 95℃ 10S； 60℃ 30S 40循环；熔解曲线 95℃ 15S；60℃ 1min；95℃ 15S；1循环 * 仪器类型不同，熔解曲线采集程序不同，使用仪器默认熔解曲线采集程序即可 | ||||||||||||
| 储存/保存方法 | -20°C 避光储存，避免反复冻融；有效期1年 | ||||||||||||
| 技术指标 | 试剂盒组成：
| ||||||||||||
| 注意事项 | 1、一般来说反应体系中引物终浓度为0.2μM可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时，可以在0.1-1.0μM范围内调整引物浓度。 2、未稀释的cDNA模板，加样体积最好不超过2.0ul，对于丰度较高的miRNA, cDNA样本可适当稀释后再进行qPCR，稀释倍数可根据反应CT值而定。 3、如PCR结果不甚理想，可考虑采用3段法温度设置进行扩增，扩增条件为：95℃ 10S； 60℃ 20S；70℃ 20S（收集荧光信号）。 4、试剂保存与操作过程中避免强光照射。 5、配制反应体系时，避免过于震荡，以防气泡产生。 6、购买该系列配套产品，公司免费提供引物设计，具体详情请与公司客服联系。 以合成的U6为样本，茎环反转录，使用本试剂盒，按说明书进行qPCR，CT值小于20。如每次使用量较少，推荐小份分装使用。 |
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文献和实验PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法利用了SYBR Green荧光染料非特异性与双链DNA结合并发光的特性，检测PCR的全部进程，从而判定初始RNA的量。 常用的miRNA第一链合成方法成熟的miRNA大小只有22nt左右，在用实时荧光定量PCR检测miRNA时，难点在于如何识别如此小的miRNA并合成第一链。目前常用的用于识别并合成miRNA第一链的方法主要有颈环法和加尾法两种。（1）颈环法原理图（2）加尾法原理图由于成熟miRNA较小，无法用常规的方法直接进行反转录、PCR
实时荧光定量PCR从1996年美国AppliedBiosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法
【讨论】关于miRNA定量PCR时引物的一些迷惑，希望高手来指点
问题2：这里的正义和反义引物是不是就是其他文章中提及的forward和reverse） 问题3，有些文章中只有forward,和reverse引物，未见反转录引物列出，是作者漏掉了，还是根本不需要反转录引物？上述问题希望高手来指点一二。越详细越好，衷心感谢 leileicui 还有一个问题，对于不同的物种，如鼠源的与人源的miRNA分子的荧光定量PCR及反转录引物是不是不同啊，可以通用吗？ zjubell 你先了解
