公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)! 产品描述: 产品名称:Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA Purge) 描述: 第一链cDNA合成预混液是以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本产品含有反转录反应所需的全部试剂(Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs)。反应时只需要加入RNA模板和水即可,操作简单,降低操作过程中的污染。本制品含有去基因组成分gDNA Purge,以RNA为模板进行cDNA第一链合成时,可以同步去除基因组DNA污染,反应结束后,75℃加热5分钟,就可以失活反转录酶,RNA酶抑制剂,gDNA Purge。合成的第一链cDNA能直接用于PCR或荧光定量PCR的模板,第二链cDNA的合成或线性RNA扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。 产品特点: 本制品采用耐高温逆转录酶,大幅度提高了热稳定性和cDNA合成效率。 本制品中添加的NovoScript Reverse Transcriptase无RNase H活性,可避免第一链cDNA合成过程中,RNA/DNA杂交模板链中RNA降解,保证cDNA合成的质量。 本制品中Random N6和Oligo(dT)18引物比例经过优化,可均匀合成样品中的cDNA。 本制品中含有去基因组成分,进一步提高定量准确性。 产品组分:
产品组成 |
50次(20ul体系) |
100次(20ul体系) |
2×Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix |
500ul |
1ml |
gDNA Purge |
50ul |
100ul |
RNase Free Water |
1ml |
1ml×2 |
实验方法: 第一链 cDNA 合成: 试剂融化后,各组分混匀稍微离心后置于冰上。 (1)去基因组 DNA 反应
模板 RNA |
总 RNA(0.1 ng -1ug) |
mRNA(≥10 pg) |
特异性 RNA(≥0.01 pg) |
gDNA Purge |
1ul |
RNase Free Water |
至 10ul |
42℃孵育 5min,反应结束后冰上放置。 (2)逆转录反应
第一步反应液 |
10ul |
2×Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix |
10ul |
注:若 cDNA 后续用于 qPCR,逆转录时间:50℃孵育 15min;若 cDNA 后续用于普通 PCR,逆转录时间:50℃,孵育 30min。 (3)75℃孵育 5min,终止反应。反应产物可直接用于 PCR,如果不立即使用,-20°C保存,长时间保存建议-70°C放置。 注:当 RNA 浓度较高或目标基因属高拷贝基因时,可将去基因组和逆转录合为一步操作,更省时省力。所有组分加到一起,50℃孵育 15-30min,最后 75℃孵育 5min 终止反应即可。
第一链 cDNA 的 PCR 扩增: 合成的第一链cDNA可直接用于PCR。 常用反应体系(50ul):
2×Taq Master Mix* |
25ul |
上游引物 |
0.2-1.0uM(终浓度) |
下游引物 |
0.2-1.0uM(终浓度) |
模板 |
1-2ul |
ddH2O |
至 50ul |
*Mg2+终浓度为2mM 常用 PCR 循环:
94℃ |
1分30秒 |
30 次循环 |
94℃,20秒 |
57℃,20秒 |
72℃,1kb/60秒 |
72℃ |
5 分钟 |
4℃ |
保温 |
储存/保存方法: -20℃ 注意事项: 1、用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。 2、确保所用试剂中无RNA酶污染。 3、试剂盒要严格密封保存。在反转录过程中,所有管子要确保扣严。 4、纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。 5、为保证反转录反应的有效进行,需使用高质量的RNA模板。 6、有实验结果提示,本反转录酶可在20分钟内完成11kb反转录反应。 产品信息订购:
产品货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
大包装及货期 |
abs60076 |
Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA Purge) |
50次(20μl体系) |
630.00 |
立即咨询 |
abs60076 |
Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA Purge) |
100次(20μl体系) |
1134.00 |
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