手机验证
询价列表
暂时没有已询价产品
微信扫一扫分享
分享到新浪微博
分享到丁香园论坛
Two-Step RT-PCR
企业认证
-20℃
-
99
爱必信(上海)生物科技有限公司
1kit
公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)!
产品描述:
产品名称:Two-Step RT-PCR Kit
描述:
Two-Step RT-PCR Kit两步法RT-PCR试剂盒具有高效合成能力和高扩增效率。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板,用2×1st Strand cDNA Synthesis SuperMix进行反转录,然后用2×HotStart Taq Master Mix进行扩增。本试剂盒含有从RNA到cDNA,以cDNA为模板进行扩增的全部试剂,本试剂盒RT 50次/PCR 200次。
产品特点:
操作简单:操作步骤少,降低污染。
特异性高:使用HotStart Taq酶进行扩增,减少非特异性反应。 产品组分:
组分名称
体积
2×1st Strand cDNA Synthesis SuperMix
500ul
2×HotStartTaq Master Mix
1ml×2
RNase Free Water
1ml
实验方法:
第一链 cDNA 合成:
试剂融化后,将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
(1)按顺序加入以下反应物:
模板 RNA
总RNA(0.1 ng -5μg)
poly(A) mRNA(10 pg)
特异性 RNA(0.01 pg)
10ul
至20ul
可选步骤:如果 RNA 模板 GC 含量高或者含有二级结构,可先将RNA 模板和 RNase Free Water 混匀后,65°C 孵育 5 分钟(有助于打开高级结构,便于下一步反应的进行),迅速置于冰上冷却,再加入其它组分。
(2) 轻轻混匀,离心。
(3)42°C 孵育 15-30 分钟(如果 RNA 模板中不含 poly A 结构,25°C 先孵育 5 分钟,随后 42°C 孵育 15-30 分钟)。
(4)产物可直接用于下一步反应。如果不立即使用, 可于-20°C保存一周,长时间保存建议-70°C放置。
第一链 cDNA 的 PCR 扩增:
合成的第一链cDNA可直接用于PCR。
常用反应体系(20μl):
2×HotStart Taq Master Mix
上游引物
0.2-1.0uM(终浓度)
下游引物
模板
1-2ul
ddH2O
常用 PCR 循环:
当扩增片段<3K
94℃
5 分钟
30 次循环:
94℃,20 秒
50-60℃,20 秒
72℃,60 秒/kb
72℃
4℃
保温
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp)
94℃,5 秒
68℃,60 秒/kb
储存/保存方法: -20℃
注意事项: 1、本试剂盒进行PCR扩增时延伸时间为1kb/min,客户可根据具体片段长度进行延伸时间的调整。 2、如果同时操作多个样品,建议先在冰上先配制预混液,然后再分装到各个反应管中,加入模板启动反应。 3、反应扩增时出现目标条带拖带,系模板浓度过高或特异引物浓度不适等原因所致,可对模板及引物浓度等进行调整;反应出现杂带,可对退火温度进行调整,或重新设计特异性高的引物。 4、为了保证反应的正常进行,需使用高质量的RNA模板。
产品信息订购:
产品更多信息请进入爱必信(absin)商城查看》》》
absin,您身边的科研百宝箱专业提供试剂、耗材、仪器,在线订购,7*24h全国发货,方便快捷!
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
需要更多技术资料 索取更多技术资料
239 人阅读发布时间:2023-03-08 16:59
马上登录 或注册,即可保存询价历史