Corticosterone ELISA Kit

碧云天的Corticosterone ELISA Kit (Corticosterone Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即皮质酮酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测皮质酮的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为13.5ng/ml；与17-β-雌二醇、17-α-乙炔雌二醇的交叉反应性小于3%，与雌酮的交叉反应性小于5%，与雌三醇的交叉反应性小于6%，与雄烯二酮、17-羟孕酮、醛固酮、睾酮、孕酮的交叉反应性小于1%；板内、板间变异系数均小于10%。

皮质酮(Corticosterone)是啮齿动物、鸟类、两栖动物和爬行动物的主要糖皮质激素(Glucocorticoid)，并且在绵羊、猪和狗中也大量存在。在人类中，皮质酮仅具有微弱的糖皮质激素活性，并且主要作为从孕烯醇酮到醛固酮的类固醇生成途径中的中间体而发挥重要作用。糖皮质激素调节多种生物过程，是生理应激反应的关键介质[1]。

糖皮质激素是通过类固醇生成酶(Steroidogenic enzymes)从胆固醇从头合成的，主要在肾上腺皮质中合成，但也可以通过一些外周组织中存在的类固醇生成酶从类固醇前体合成。像所有的类固醇激素一样，糖皮质激素被释放到循环中。在循环中，大多数糖皮质激素分子(高达95%)与皮质类固醇结合蛋白(Corticosteroid binding protein, CBP)结合，这会限制类固醇的生物利用度。不受CBP结合的糖皮质激素从血流中自由扩散到外周组织并穿过细胞质膜。糖皮质激素作用的主要机制是通过细胞溶质糖皮质激素受体(GR/NR3C1)的激活，该受体是配体结合核受体转录因子超家族(Superfamily of ligand-binding nuclear receptor transcription factors)的成员。皮质酮还结合并激活膜定位受体以启动快速细胞内信号传导[2,3]。

血清糖皮质激素浓度遵循昼夜节律模式。它们可以在24小时内显示3-5倍的变化，并且在醒来前最高。糖皮质激素也会因情绪或身体压力而释放，并介导急性和慢性压力反应。在人类中，库欣综合征与糖皮质激素分泌过多有关，而自身免疫性阿狄森氏病与糖皮质激素分泌不足有关[4,5]。

本试剂盒采用竞争法ELISA (Competitive ELISA)检测样品中Corticosterone的浓度，其原理见图1。高特异性识别Corticosterone的抗体已预包被于酶标板上，同时加入样品和辣根过氧化物酶标记Corticosterone，样品中的Corticosterone与辣根过氧化物酶标记Corticosterone竞争性结合酶标板中包被的抗体。随后洗去游离的Corticosterone与游离的辣根过氧化物酶标记Corticosterone。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的TMB氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。如果样本中Corticosterone含量越多，则与抗体结合的辣根过氧化物酶标记Corticosterone就越少，颜色越浅，即颜色与样品中的浓度成反比。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。Corticosterone浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中Corticosterone浓度。

图1. 竞争法ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PC100-1	Corticosterone抗体预包被板	8孔×12条
PC100-2	样品稀释液	16ml
PC100-3	Corticosterone标准品	2-4瓶
PC100-4	辣根过氧化物酶标记Corticosterone	2瓶
PC100-5	洗涤液(20X)	30ml
PC100-6	TMB溶液	10ml
PC100-7	样品酸化液	10ml
PC100-8	样品中和液	10ml
PC100-9	终止液	5ml
PC100-10	封板膜(透明)	2张
PC100-11	封板膜(白色)	2张
—	说明书	1份

保存条件：

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

注意事项：

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。