超高速视频级原子力显微镜—HS-AFM

超高速视频级原子力显微镜

超高速视频级原子力显微镜—HS-AFM

 

原子力显微镜（Atomic Force Microscope，AFM），一种可用来研究包括绝缘体在内的固体材料表面结构的分析仪器。它通过检测待测样品表面和一个微型力敏感元件之间的极微弱的原子间相互作用力来研究物质的表面结构及性质。将一对微弱力极端敏感的微悬臂一端固定，另一端的微小针尖接近样品，这时它将与其相互作用，作用力将使得微悬臂发生形变或运动状态发生变化。扫描样品时，利用传感器检测这些变化，就可获得作用力分布信息，从而以纳米级分辨率获得表面形貌结构信息及表面粗糙度信息。原子力显微镜可以测量材料物理性质、力学性能、磁学性能、热学性能、电学性能等方面的一些特征信息，但在扫描成像速度上一直存在局限性，太慢的扫描速度导致原子力显微镜无法捕捉到分子间的相互作用过程和一些快速的分子动态变化。

 

超高速视频级原子力显微镜（High-Speed Atomic Force Microscope，HS-AFM）由日本 Kanazawa 大学 Prof. Ando 教授团队研发，日本RIBM公司（生体分子计测研究所株式会社，Research Institute of Biomolecule Metrology Co., Ltd）商业化的产品，可以达到视频级成像的商业化原子力显微镜。HS-AFM突破了传统原子力显微镜“扫描成像速慢”的限制，能够在液体环境下超快速动态成像，分辨率为纳米水平。样品无需特殊固定，不影响生物分子的活性，尤其适用于生物大分子互作动态观测。超高速视频级原子力显微镜HS-AFM主要有两种型号，SS-NEX样品扫描（Sample-Scanning HS-AFM）以及PS-NEX探针扫描（Probe-Scanning HS-AFM）。推出至今，全球已有100多位用户，发表 SCI 文章 300 余篇，包括Science, Nature, Cell 等杂志。

 

相较于目前市场上的原子力显微镜成像设备，HS-AFM突破了 “扫描成像速慢”的限制，扫描速度高可达 20 frame/s，并且有 4 种扫描台可供选择。样品无需特殊固定染色，不影响生物分子的活性，尤其适用于生物大分子互作动态观测。液体环境下直接检测，超快速动态成像，分辨率为纳米水平。探针小，适用于生物样品；悬臂探针共振频率高，弹簧系数小，避免了对生物样品等的损伤。悬臂探针可自动漂移校准，适用于长时间观测。采用动态PID控制，高速扫描时仍可获得清晰的图像。XY轴分辨率2nm；Z轴分辨率0.5nm。

HS-AFM不仅拥有超高扫描速率与原子级别分辨率，而且具有操作的简易性，使得对单分子动态过程的捕捉变得十分方便，为科研工作者研所和理解生物物理、生物化学、分子生物学、病毒学以及生物医学等领域的单分子动态过程提供了一款强大的工具。

全新的HS-AFM采用了新的高频微悬臂架构，更低噪音、更高稳定性的2控制器，高速扫描器，缓冲防震设计，主动阻尼，动态PID，驱动算法优化，多种前沿技术，可以实现在超高速下获取高分辨的生物样品信息。新系统整合了基于工作流程的操作软件，直观的用户界面与流程化、自动化的设置使得研究人员可以专注于实验设计，不需要复杂的操作和条件设置，快速获取数据，加速研究的产出。

 

日本RIBM公司的超高速视频级原子力显微镜HS-AFM的创新点：

★   高频微悬臂

弹性系数:   0.1 N/m   

曲率半径:   <10 nm　

共振频率:   400-600kHz in liquid

★   高速扫描台

20 frames/s.   (Standard scanner)

★   缓冲防震+主动阻尼+动态PID+算法优化

缓冲防震

主动阻尼

动态PID控制：可自动改变反馈增益，保证了HS-AFM在高速扫描条件下仍可获得清晰的图像

探针自动漂移校准，适用于长时间样品观测

 

     

 

日本RIBM公司的超高速视频级原子力显微镜HS-AFM的的应用领域：

 

从单分子到单细胞，都可直接观测

 

 

1、肌动蛋白

 

2、CRISPR-Cas9

 

 

3、膜联蛋白

 

 

4、IgG

 

 

5、活细胞

 

 

6、细菌视紫红质

 

 

7、DNA纳米结构

 

 

8、仿生聚合物

 

 

日本RIBM公司的超高速视频级原子力显微镜HS-AFM的视频案例

 

1：IgG

在溶液中观察到抗体(IgG)。

IgG呈"Y"形，两个Fab区区分清晰。

由于锚定能力较弱，IgG保持其抗原结合能力。

 

2：Plasmid DNA

传统AFM在没有强锚定的情况下，DNA分子图像出现摆动。

然而，强锚定可能会削弱真实的结构和行为。

HS-AFM能清晰显示质粒的结构和运动，无强锚定。

 

3：DNA内切酶的消化：DNase I

DNA酶I是一种随机消化DNA的核酸内切酶。视频中的箭头表示DNase I消化DNA的部分。

请参考从DNA末端消化的核酸外切酶Bal31的视频。

 

 4：DNA外切酶消化：Bal31

Bal31是一种从DNA链末端消化DNA的核酸外切酶。

视频显示Bal31的活性沿着DNA移动，并逐渐从DNA链的末端消化。

最后，DNA分子被完全消化，但环状DNA未被消化。高光点是Bal31分子，它们与DNA的不同位置结合。
 

 

5：DNA聚合酶的DNA延伸：Phi29

双链DNA(黄色)随着时间的推移而拉长。单链λDNA作为模具固定在基板上。

由于从随机六聚体引物(Red)结合到λDNA模体，phi29聚合酶(Black)以dNTP为底物合成互补DNA。
 

 

 

6：链亲和素2D晶体中的点缺陷

成功地观察到点缺陷在晶体中的扩散。

从图像上看，两个单空位缺陷的轨迹跟踪相对于晶格的两个轴是明显的各向异性的。

 

北京佰司特科技有限责任公司

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