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克隆形成实验
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佰欧晶医学
每孔
细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的重要技术方法。
当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。其中细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。
贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。
克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。一、实验目的通过对细胞处理后在细胞培养板上的克隆形成能力来提示处理后细胞的增殖能力。二、实验原理克隆形成是测定细胞增殖能力的有效方法之一。单个细胞在体外持续6 代以上,其后代所组成的细胞群称为克隆。这时每个克隆含有50 个以上的细胞,大小在0.3-1.0mm 之间,通过计数克隆形成率,可对单个细胞的增殖潜力做定量分析,了解细胞的增殖能力和独立生存能力。三、实验步骤1.将处于对数生长期的各实验组细胞胰酶消化后,完全培养基重悬成细胞悬液,并计数。2.细胞接种:于6孔板培养板中各实验组接种600个细胞/孔,每个实验组设3个复孔。3.将接种好的细胞于培养箱中继续培养到14天,中途每隔3 天进行换液并观察细胞状态。4.实验终止前荧光显微镜下对细胞克隆进行拍照,PBS洗涤细胞1次。5. 每孔加入固定液,固定细胞30-60 min,PBS洗涤细胞1次。6. 每孔加入洁净、无杂质结晶紫染液1000 μL,染细胞10-20 min。7. ddH2O洗涤细胞数次,晾干,数码相机拍照整,克隆计数。
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83 人阅读发布时间:2022-11-16 15:04
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