- ￥2990
- 博尔森/BIOESN
- BES231635P
- 中国
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
ASFC SYBR qPCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
非洲猪瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine FeverVirus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死率几乎高达100%， ASF 最近在我国爆发，给我国养猪业造成重大损失，因此 ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本公司产品开发非洲猪瘟病毒染料法荧光定量 PCR 试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物根据非洲猪瘟病毒 P72 基因专一区设计，特异性高。
3. 荧光定量 PCR 检测，比常规 PCR 更加灵敏。
4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
【检验原理】
本试剂盒采用 SYBR Green 染料法实时荧光 PCR 技术，针对非洲猪瘟病毒的基因高度保守区域设计特异性引物，用荧光 PCR 技术对非洲猪瘟病毒的核酸进行体外扩增检测，在反应体系中含非洲猪瘟病毒模板的情况下，PCR 反应得以进行并释放荧光信号，利用仪器对 PCR 过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性、定量分析。
【试剂组成】
| 名称 | 规格 |
| 非洲猪瘟病毒扩增液 | 50μL×1管 |
| 非洲猪瘟病毒反应液 | 950μL×1管 |
| 非洲猪瘟病毒阳性质控品 | 50μL×1管 |
| 非洲猪瘟病毒阴性质控品 | 50μL×1管 |
| 说明书 | 1份 |
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 12 个月。
【自备物品及仪器】
ABI 、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
自备：无 DNA/RNA 酶的 1.5mL 离心管，0.2mL PCR 反应管，滤芯吸头(规格:10μL，200μL，1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器。
【样品要求】
1. 根据实际情况采样，胃液分泌物、胃液呕吐物以及样品培养物作为检测样本，具体参考《临床微生物样本采集规范》。
2. 应避免样本间交叉污染，样本采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃以下。
【样品保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
按照试剂盒操作说明或者临床样品处理方法做好样品前处理。
1.2 DNA 提取
根据您实验室的具体情况和样品类型，选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠，我们建议使用商品化的试剂盒进行提取，严格按照对应试剂盒说
明书进行操作，样本核酸提取过程中应避免污染，提取好的模板样品如不能立即检测，建议-15℃以下保存。
推荐采用我们公司研发生产的试剂盒：细菌基因组 DNA 提取试剂盒(离心柱法)
2. 试剂配制（试剂准备区）
2.1 从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温（20～25℃），注意避免强光照射，待完全溶解后振荡混匀并低速离心 10 s，使用低吸附吸头分液取样，避免试剂损失和
浪费。
2.2 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 非洲猪瘟病毒反应液 | 非洲猪瘟病毒扩增液 |
| 用量（样本数为N） | 19μL | 1μL |
2.4 盖紧八联 PCR 反应管盖, 并注意做好相应标识（请标记在八联 PCR 反应管盖两端突出部位，切勿标记在八联 PCR 反应管盖中间）。将 PCR 反应管转移至样本准备
区，剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心，核酸加样过程中应避免污染。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内。
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25 μL。
荧光通道选择：检测通道荧光染料法(SYBR Green I)， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 变性 | 1 cycle | 95℃ | 3min | 否 |
| 2 | 退火-延伸 | 40 cycle | 95℃ | 15sec | 否 |
| 60℃ | 30sec | 否 | |||
| 3 | 溶解曲线阶段 | 1 cycle | 95℃ | 使用仪器默认程序 | 否 |
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop
值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤38.0 和典型扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
阴性：检测结果 Ct 值无 Ct 值，无明显的扩增曲线。
6. 质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤30；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 产品性能指标
阴阳性参考品符合率：5 份阳性参考品符合率为 100％；10 份阴性参考品符合率为 100％。
最低检测限：1.0×103copies/mL。
精密度：批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数（CV）均小于等于 3%。
8. 检测方法的局限性
Ø 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
Ø 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
Ø 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
Ø 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
Ø 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果。
9. 注意事项
Ø 所有操作严格按照说明书进行；
Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；
Ø 反应液应避光保存；
Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
【厂家信息】：
Ø 公司名称：上海博尔森生物科技有限公司
Ø 网址：www.bioesn.net
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验恩泽康泰进军家畜外泌体研究领域——全面解锁猪/牛/羊/鸡外泌体研究
的潜在指标(Animal. 2021 Apr;15(4):100182. IF=3.6 2区)，等研究。 b.疫病/家畜疾病 急性肺损伤、猪流行性腹泻病毒感染、非洲猪瘟病毒（ASFV）、亚洲鸡瘟感染传播等，在养猪等家畜业都有一定的发病率，给患病动物造成了极大的痛苦，同时也给养殖户造成了巨大的经济亏损，严重的可造成患病动物死亡。因此，阐述外泌体介导的家畜疾病发病和感染病毒传播机制，也是一个需要进行研究的方向，以期为家畜养殖生产中相关疾病防控提供
，不靠壁，不贴液面。 混匀平均分装的注意事项： 1、第一管吸液前需要先把枪头在液面中浸润一下，以保证三复孔的枪头吸液量是差不多的。 2、用混匀器进行混匀，不要用移液器吹打。 详细说明书 transhold cat. A2010A0112荧光定量PCR Premix试剂盒(荧光染料) （FQ
所特有的，下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率，把引物二聚体调整到越小越好；探针法则需要设计荧光探针，这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个：完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上；这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置，根据自己试验情况而定，本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
