- ￥4490
- 博尔森/BIOESN
- BES231523P
- 中国
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Enterovirus Group B(EV-B) Probe qRT-PCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
规格：50T/盒
【产品简介】：
肠道病毒（Enterovirus）引起的传染病，临床表现轻者只有倦怠、乏力、低热等，重者可全身感染，脑、脊髓、心、肝等重要器官受损。本类疾病分布于世界各地，在热带和亚热带全年都有，在温带夏季多见，在温暖、潮湿、卫生条件差、人群拥挤的地区发病率高。肠道病毒共含有 71 个血清型。本产品以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测肠道病毒 B 组的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据肠道病毒 B 组高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA 发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研
【检验原理】：
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，设计一对肠道病毒B组特异性引物，结合一条特异性探针，用一步法荧光RT-PCR技术对肠道病毒B组的核酸进行体外扩增检测。
【包装规格及成分】：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 肠道病毒B组扩增液 | 50μL×1管 |
| 试剂二 | 肠道病毒B组反应液 | 950uL×1管 |
| 试剂三 | 肠道病毒B组阳性质控品(5.59E+04) | 50μL×1管 |
| 试剂四 | 肠道病毒B组阴性质控品 | 50μL×1管 |
| 产品说明书 | 1份 | |
注：
|
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1.试剂盒应置于-15℃以下冷冻避光储存；有效期12个月，采用泡沫盒加生物冰袋密封运输，温度不超过8℃，生产日期及有效期详见外包装盒。
2.试剂盒避免反复冻融，冻融次数不超过5次，开封后-15℃以下冷冻避光储存，不影响有效期内使用。
【适用仪器】：
ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】：
1.根据实际情况可采取病毒/组织/血液等样品1g作为检测样本
2.应避免样本间交叉污染，样本采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃以下。
【样本保存及运输】：
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】：
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1)组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；
2)全血样本：待血凝固后，取血清100μL于1.5mL灭菌离心管中。
1.2核酸（RNA）提取
根据您实验室的具体情况和样品类型，选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠，我们建议使用商品化病毒DNA/RNA提取试剂盒进行提取，严格按照对应试剂盒说明书进行操作，样本核酸提取过程中应避免污染，提取好的模板样品如不能立即检测，建议-15℃以下保存。
推荐采用我们公司研发生产的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒
2.试剂配制（试剂准备区）
2.1从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温（20～25℃），注意避免强光照射，待完全溶解后振荡混匀并低速离心10 s，使用低吸附吸头分液取样，避免试剂损失和浪费。
2.2根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 肠道病毒B组反应液 | 肠道病毒B组扩增液 |
| 用量（样本数为N） | 19μL | 1μL |
2.4盖紧八联PCR反应管盖,并注意做好相应标识（请标记在八联PCR反应管盖两端突出部位，切勿标记在八联PCR反应管盖中间，以免影响信号采集）。将PCR反应管转移至样本准备区，剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。
3.加样（样本处理区）
将步骤1.2提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心，核酸加样过程中应避免污染。
4.PCR扩增（核酸扩增区）
4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内,并记录放置顺序；
4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；
4.3荧光通道选择：检测通道选择FAM，淬灭通道选择NONE，参比荧光选NONE。
【推荐循环参数设置】：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 50℃ | 15min | 否 |
| 2 | 1 cycle | 95℃ | 3min | 否 |
| 40 cycles | 95℃ | 15sec | 否 | |
| 55℃ | 30sec | 是 |
5.1结果分析条件设定
设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2结果判断
l阳性：检测通道Ct值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。
l可疑：检测通道Ct值>35.0，且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现Ct值≤38.0和典型扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
l阴性：检测结果Ct值无Ct值，无明显的扩增曲线。
6.【质控标准】
l阴性质控品：无明显扩增曲线或无Ct值显示；
l阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤30；
l以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7.【产品性能指标】
l阴阳性参考品符合率：5份阳性参考品符合率为100％；10份阴性参考品符合率为100％。
l最低检测限：1.0×103copies/mL。
l精密度：批内、批间精密度检测Ct值的变异系数（CV）均小于等于3%。
【厂家信息】：
Ø 公司名称：上海博尔森生物科技有限公司
Ø 网址：www.bioesn.net
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验性引物。在引物探针设计时就需要特别考虑扩增片段不能太长，否则那些降解的RNA片段无法被检测到，导致得到的结果不准确。 QIAGEN 全新发布的TaqMan引物探针 - QuantiFast Probe Assays就特别考虑到了 另外由于FFPE样品中的核酸高度片段化且相互交联，抽提得到的RNA中有较多的基因组DNA片段残留，这些残留的gDNA也会被扩增出来，严重影响了基因表达分析结果的真实性。 QIAGEN 全新发布的探针法检测试剂盒 -QuantiFast Probe RT-PCR
相关专题 实验室很多同学都要做Real time PCR实验，实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见，不过也有实验室前没有做过的，查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。 荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物，探针法的出现使得定量PCR技术的特异性比常规PCR技术大大提高。目前较常提及的有TaqMan探针、FRET杂交 探针(荧光共振能量传递探针)和分子
所特有的，下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率，把引物二聚体调整到越小越好；探针法则需要设计荧光探针，这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个：完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上；这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置，根据自己试验情况而定，本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
