Ultima活体双光子荧光成像系统

活体荧光成像系统（图）

一、 技术简介活体生物荧光成像技术（in vivo bioluminescence imaging）是近年来发展起来的一项分子、基因表达的分析检测系统。它由敏感的CCD及其分析软件和作为报告子的荧光素酶（luciferase）以及荧光素（luciferin）组成。利用灵敏的检测方法，让研究人员能够直接监控活体生物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据， 得到多个时间点的实验结果。相比之下，可见光

美国新晋院士Nat Methods发表成像新技术

，而且对于活体生物样品无伤害，和毒副作用。 这项技术就是单层光显微技术(light sheet microscopy)，这一显微技术利用薄的，扁平的单层光照射生物样品，从而可以对数毫米的样品进行观察，并能进行荧光成像。原理见下图。 利用这种技术，研究人员可以观察细小生物体和胚胎组织。之前曾有科研工作者使用改进的单层光显微技术观察斑马鱼胚胎在24小时内的发育状况，并获得了数千个细胞的整体图像。 在这一显微技术的基础上，研究人员利用了双光子激活来提高成像的分辨

荧光标记怎么选择？

光蛋白都有其独特的激发波长和发射波长，需匹配荧光成像系统的检测范围。同时检测多种荧光蛋白时，需避免颜色和光波长的冲突。绿色和红色荧光蛋白较为常用。红色或近红外的荧光蛋白更适用于活体成像。 单体性质：荧光蛋白多聚体可能会影响融合蛋白的生物学功能和定位，应尽量选择单体。 亮度：荧光蛋白的亮度值由消光系数与量子产率的乘积计算得出。在许多情况下，将荧光蛋白的亮度与 EGFP（设定为 1）进行比较（表 1），应选择足够亮的荧光蛋白便于检测和成像。 PK 值：每个荧光蛋白都有其最适 pH 值，此时的荧光强度最高。在细胞