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土壤亚硝酸还原酶(S-NiR)
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6个月
S-NiR测试盒
730
上海机纯实业有限公司
50管/24样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义:土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一,参与亚硝酸盐至NO的还原反应,它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率,为氮素转化规律的研究提供一定的依据。测定原理:亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少,即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。需自备的仪器和用品:天平、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿。试剂的组成和配制:试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加10mL蒸馏水溶解。试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。(如出现沉淀可以70-80℃加热溶解)试剂四:液体25mL×1瓶,4℃避光保存。(如出现沉淀可以70-80℃加热溶解)试剂五:液体25mL×1瓶,4℃避光保存。工作液:临用前根据用量将试剂四和试剂五以1:1的比例混合。样品处理:新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。计算公式:标准曲线:y = 1.5562x+ 0.0088,R2 = 0.996;x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值(A标准管-A空白管)。酶活单位定义:每g土样每天还原1μmol NO2ˉ 的量为一个酶活力单位。S-NiR(μmol /d /g土样)=[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088] ×V标÷1.5562÷W÷T = 3.084×[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]÷WT:反应时间,1h=1/24d;V标:标准液体积,0.2mL; W:样本质量,g。注意事项:1.配制的工作液3天内使用完。2.若吸光值超过3,将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色,并在计算公式中乘以稀释倍数。3.严格控制显色时间,否则会对结果有影响。4.标准曲线线性范围为0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。5.A空白管-(A测定管-A对照管)线性范围为0.02-3。
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