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共价结合型果胶(CSP)科研专
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6个月
CSP测试盒
811
上海机纯实业有限公司
50管/24样
注 意 :正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是许多高等植物细胞壁中含量丰富的多糖成分,其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联,通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶,如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。测定原理:利用带有螯合剂的碱溶液提取共价结合型果胶(CSP)。如水溶性果胶(WSP)、离子结合型,生成物质在530 nm处有大吸收峰。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80%乙醇、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。试剂的组成和配制:试剂一:液体50mL× 1瓶,4℃保存。试剂二:液体50mL× 1瓶,4℃保存。试剂三:标准液1mL× 1支,4℃保存。试剂四:液体5 mL× 1瓶,4℃保存;样品的前处理: 1、细胞壁的提取:取约0.3g样本,加入1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴20min,冷却至室温,4000g 25℃离心10min,弃上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇洗一遍(涡旋振荡2min左右,4000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1mL试剂一(去除淀粉)浸泡15小时,4000g 25℃离心10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。2、CSP的提取:称取烘干的CWM 3mg,加入1mL试剂二,充分匀浆(若烘干物质质地坚硬,可先研碎后再加入1mL试剂二匀浆,或者用匀浆器匀浆)。8000g 4℃离心10min,取上清液待测。CSP含量计算:CSP含量(mg /g 干重)= (C标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数C标准:标准管浓度,0.05mg/mL;V1:加入样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1mL; W:样本干重,g。注意:低检测限为50μg /g 干重
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