Fd-谷氨酸合成酶活性检测试剂盒 | Fd-GOGAT含量测

注 意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：
GOGAT 广泛分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成 GS/GOGAT 循环，参与氨同化的调控。GOGAT 分为以 NADH 为还原剂的 NADH-GOGAT 和以铁氧还蛋白为还原剂的Fd-GOGAT。Fd-GOGAT 主要存在于叶绿体基质中，与光合作用和光呼吸有关，主要同化NO3-还原和光呼吸产生的 NH4+。

测定原理：
Fd-GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸，谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸的脱氢反应，同时产生 NADH，使 WST-8 显橙，在 450 nm 下测定吸光值。

需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 12mL 试剂六溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 5mL 蒸馏水溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 20mL 试剂六溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存；
试剂五：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存；
试剂六：液体 40mL×1 瓶，4℃保存；

粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。