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黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒 |
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6个月
XOD含量测试盒
163
上海机纯实业有限公司
100管/96样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:XOD(EC 1.17.3.2)催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子,是活性氧主要来源之一;同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心,肺,肝脏等组织中,当肝功能受损时,XOD大量释放到血清中,对肝损害的诊断具有特异性的意义。测定原理:XOD催化黄嘌呤产生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰。需自备的仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制:提取液:100mL×1瓶,4℃保存;试剂一:30mL×1瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存。粗酶液提取: 1、细菌、细胞或组织样品的制备:细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。2、血清(浆)样品:直接检测。
操作步骤:1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至290nm,蒸馏水调零。2、XOD检测工作液的配制:用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一,充分混匀,待用;现配现用;3、测定前将XOD检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。4、准备96孔UV板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于340nm务必使用UV板)。5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL样本和250μL工作液,立即混匀并计时,记录290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。
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