白蛋白检测试剂盒(溴甲-酚绿比色法)

白蛋白检测试剂盒(溴甲-酚绿比色法)
产品简介：
总蛋白(TotalProtein，TP)由白蛋白和球蛋白组成，检测白蛋白的方法有双缩脲法、色氨酸法、染料结合法，其中检测白蛋白的染料结合法可采用溴甲-酚绿或溴甲-酚紫染料结合，上述染料对白蛋白具有高度的亲和力，通常监测染料与白蛋白结合的初速率，该速率与样品中白蛋白浓度成正比。

白蛋白检测试剂盒(溴甲-酚绿比色法)检测原理是在酸性环境下，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲-酚绿(Bromocresolgreen，BCG)结合生成蓝绿色复合物，在628nm处有吸收波，该复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，求得待测样品中白蛋白浓度，多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的蛋白含量测定，该法操作简单、方法特异，既可手工操作，又可采用自动分析仪检测。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
          
自备材料：
1、离心管、小试管
2、比色杯
3、分光光度计

操作步骤(仅供参考)：
1、取0.5ml白蛋白标准配制液或稀释液加入到白蛋白标准(20mg)，充分溶解后配制成40mg/ml白蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的白蛋白标准溶液应-20℃保存。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，白蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。例如待测蛋白溶解于蔗糖，亦取白蛋白标准溶解于蔗糖，一般也可以用0.9%NaCl或PBS作为溶解白蛋白标准品的稀释液。
2、样本处理：血清、血浆样本直接取10μl检测，对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水(ml)=1：9比例，加入9倍体积的生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，2500g离心10min，取10μl上清待检。
3、白蛋白蛋白加样:按照下表设置系列管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置平行孔。
4、白蛋白测定：先以空白管调零，顺序加入BCG试剂，并立即混匀，室温放置(30±3)s，比色杯光径1cm，在分光光度计628nm处读取标准管和各测定管的吸光度(即为A标准、A测定)。
5、(备选步骤)当遇到脂血混浊，可设”样本空白管”：取0.01ml待测样品加入2mlBCG空白试剂即为“样本空白管”，以BCG空白试剂调零，读取“样本空白管”的吸光度，用测定管的吸光度减去“样本空白管”的吸光度后的净吸光度，计算白蛋白浓度。

计算：白蛋白(g/L)=A测定/A标准×白蛋白标准液浓度(g/L)
A测定=测定管的吸光度
A标准=标准管的吸光度

参考区间：
4～14岁儿童    8～54g/L
健康成年人    34～48g/L

注意事项：
1、白蛋白标准粉末溶解于白蛋白标准配制液后，即获得白蛋白标准原液，该原液中含有
防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。
2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，使用酶标仪测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著增加。
3、本法线性范围是10～60g/L。
4、该法测定正常样本的批间变异系数为6.3%。