尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏微板法)

尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏微板法)
产品简介：
尿素(Urea)又称碳酰胺(carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物，也是目前含氮量的氮肥；尿素检测方法大致分为化学方法和酶学方法，后者被认为是间接方法，先经尿素酶(脲酶)分解尿素为铵离子，然后根据波氏反应检测铵离子的生成量。

尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏微板法)检测原理是尿素酶水解尿素，产生氨和二氧化碳，氨在碱性条件下与苯酚等反应生成蓝色吲哚酚，吲哚酚的生成量与尿素含量呈正比，通过酶标仪测定560nm处吸光度，该试剂盒可用于测定人体、动物的血浆、血清、尿液等样品中尿素(旧称尿素氮，BUN)含量，但尿液经过处理后再行检测。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、水浴锅或恒温箱、离心管或小试管
2、酶标仪、96孔板
3、无氨蒸馏水、沸石

操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①血浆、血清：血浆、血清按照常规方法制备，直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存。
②尿液：尿液样品处理后测定，方法如下：取0.6ml尿液样品，加入沸石0.3g，加入无氨蒸馏水至15ml，反复震荡数次，吸附尿液中的游离铵盐，静置后，吸取稀释尿液，所测结果乘以25，如果尿液比较少，可以等比例减少各试剂的使用量。如果取1ml尿液样品，应加入沸石0.5g，加入无氨蒸馏水至25ml，反复震荡数次，吸附尿液中的游离铵盐，静置后，吸取稀释尿液，所测结果乘以25。
2、配制标准品工作液：取适量的尿素标准(100mmol/L)，按尿素标准(100mmol/L)：ddH2O=1:19的比例混合，使尿素浓度达到5mmol/L，即为标准品工作液-尿素标准(5mmol/L)；4℃保存，1周有效。
3、配制脲酶工作液：取适量的脲酶溶液，按脲酶溶液：脲酶稀释液=1:99的比例混合，即
为脲酶工作液；4℃避光保存，1月有效。
4、Urea加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的Urea浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
5、Urea测定：充分混匀，37℃水浴20min，酶标仪测定560nm处吸光度，空白孔调零，读取各孔吸光度，分别为A标准、A测定。

计算：
尿素(mmol/L)=(A测定/A标准)×5mmol/L
式中：A测定=测定孔的吸光度
A标准=标准孔的吸光度

参考区间：
成年人血清尿素    2.9~8.2mmol/L
注意事项：
1、本实验可测定560和630nm处的吸光度。
2、如果没有酶标仪，也可用分光光度计测定，但应注意加入试剂量不同，相应的检测次数会大大减少。
3、避免使用铵盐抗凝剂，否则会使结果偏高。
4、高浓度氟化物可抑制尿素酶，引起结果假性偏低。
5、采用酶标仪未调零情况下，空白管OD值一般在0.08~0.18之间，5mmol/L标准管参考范围一般在0.35~0.55之间。
6、以肉眼观察，一般情况下尿素浓度≤1mmol/L可显淡绿色或淡蓝色，浓度≥2mmol/L即可显蓝色，浓度≥15mmol/L即可显深蓝色，一般情况下接近上限比接近下限更准确。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录：参考标准曲线范围：根据说明书操作步骤采用酶标仪570nm测定尿素标准在0、0.2、0.4、0.6、0.8、1、3、5、10、15、20、25mmol/L时的吸光度，据此作出其标准曲线如下：

注意：由于试剂批次、仪器设备、操作方法及工作环境等不同，参考范围会有差异，该值仅供参考，对于要求精确计算尿素含量的，可以采用标准曲线进行多点测定；根据测定经验显示，标准品浓度小于0.2mmol/L或大于30mmol/L，标准曲线会有偏差。